vegf、mir-205及其靶蛋白ezrin、lamina%2fc在卵巢癌中表达及意义

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：粒日期．盟年上月生日关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国

2、科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者躲牲聊签送嘿丛年上月立日VEGF、miR．205及其靶蛋白Ezrin、LaminA／C在卵巢癌中的表达及意义摘要：背景早期转移是卵巢癌的恶性特征之一，但其转移机制尚未明确。血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)在卵巢癌患者血清以及癌组织中高表达，并促进肿瘤细胞的生长、侵袭和转移。本课题组前期对VEGF诱导上皮性卵巢癌细胞株HO．8910后进行比较蛋白质组学研究，鉴定出17种差异蛋白，结合文献发现其中两种差异蛋白：Ezrin和Lam

3、inA／C与上皮性卵巢癌侵袭转移高度相关，推测ⅦGF可能通过直接或间接调控二者，参与卵巢癌侵袭转移。同时利用生物信息学方法预测miR．205在Ezfin和Lamin～C的3'UTR均有结合位点。进一步通过miRNA基因芯片检测VEGF诱导后HO．8910的miRNA表达谱，发现其miR．205表达上调。由此推测，ⅦGF可能部分通过miR．205调节Ezfin和LaminA／C的表达实现调控卵巢癌侵袭和转移。目的进一步探讨VEGF、miR-205及其靶蛋白Ezrin、Lamin～C在卵巢癌组织中的表达及意义。方法采用ELISA检测上皮性卵巢癌及健康志愿者血清中VEGF的含量；采用免疫组

4、化检测上皮性卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中血管内皮生长因子受体1(vascularendothelialgrowthfactorreceptorl，VEGFR．1)、VEGFR-2、Ezrin、LaminA／C蛋白的表达情况和CD31所标记的MVD(micro．vesseldensity)；采用免疫细胞化学技术检测VEGFR．1和VEGFR．2在四株细胞中的表达情况；采用荧光定量PCR方法检测上皮性卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中miR-205、Ezrin和LaminA／C的相对表达量。结果(1)ELISA检测VEGF在上皮性卵巢癌患者血清中的表达水平(10

5、1．48士19．44)高于在健康志愿者血清中的表达水平(30．69士3．13)，且差异具有统计学意义(P<0．05)；(2)免疫组化结果显示：IIⅦGFR．1、VEGFR-2在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率分别为75．9％31191．4％，高于卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中的阳性表达率(P<0．05)，且差异具有统计学意义；VEGFR．1和VEGFR-2在卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中的表达差异无统计学意义(胗O．05)；(3)免疫细胞化学显示：VEGFR．1和VEGFR．2在四株卵巢癌细胞株中呈强阳性表达；(4)MVD在上皮性卵巢癌组织中的平均计数(7．56士O．508)高于在

6、正常卵巢组织中的平均计数(1．224-0．556)，差异具有统计学意义(P<0．05)；在上皮性卵巢癌组织中的平均计数(7．564-0．508)高于在卵巢良性肿瘤组织的MVD平均计数(0．74-0．389)，差异具有统计学意义(氏0．05)。MVD在卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中的表达差异无统计学意义(胗0．05)；(5)Ezrin蛋白和LaminA／C蛋白在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率分别为51．7％和60．3％，低于卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中的阳性表达率，差异具有统计学意义(尸<0．05)，但两者分别在卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中的表达差异无统计学意义(胗0．05)

7、．(6)荧光定量PCR结果显示：miR．205在上皮性卵巢癌中的相对表达量高于在正常卵巢组织中的相对表达量，差异具有统计学意义伊<0．05)；miR-205在上皮性卵巢癌组织中的相对表达量高于在卵巢良性肿瘤组织中的相对表达量，但差异无统计学意义(胗0．05)。Ezrin和LaminA／CmRNA在上皮性卵巢癌组织中的相对表达量低于在正常卵巢组织中的相对表达量，差异具有统计学意义俨<0．05)；Ezrin和LaminA／CmRNA在上皮性卵巢癌组织中的相对表