沙葱黄酮提取工艺优化、结构鉴定及其相关生物活性研究

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1、内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：j参匦鱼L日期：尘竺—生L内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在

2、攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：蒸垄麴指导教师签名：{耋塞至竺垂三日期：印，≯多．／秒!IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIlUlII)IIMllllll11111lY2600665本试验由国家自然科学

3、基金(31260558)与国家科技支撑计划课题(2013BADlOB04)资助摘要沙葱广泛生长于我国西北荒漠化草原且所含营养物质丰富，且所含有营养物质丰富，拥有其独特的天然生物活性。而沙葱黄酮作为其天然活性成分之一，目前与其相关的研究报道较少。为使沙葱活性成分能够得到全面的研究与开发，本研究旨在建立一套得率较高、活性较好的沙葱黄酮提取工艺、并结合相关试验确定其抗氧化、抗菌活性及对绵羊外周血淋巴细胞免疫功能的影响作用，为沙葱有效成分的进一步研究和沙葱相关保健产品及饲料添加剂的开发与利用提供依据。本试验所得结果如下：(1)在单因素试验基础

4、上，采用响应面法对超声波和酶解法提取沙葱总黄酮的工艺进行优化，得出超声波法提取沙葱总黄酮的最佳提取工艺参数为：提取时间15rain，提取温度40℃，乙醇浓度75％，料液比1：309／mL，此条件下沙葱总黄酮得率为12．85+0．03mg／g。纤维素酶解法提取沙葱总黄酮的最佳提取工艺参数为：0．Ig脱脂脱色沙葱粉末中添加4．5mg纤维素酶，温度39℃，体系pH值为4．3，乙醇浓度为75％，料液比l：509／mE，提取时间4h，此条件下沙葱总黄酮得率为5．48+0．02mg／g。(2)比较两种方法提取所得沙葱总黄酮的体外抗氧化、抗菌及对绵

5、羊外周血淋巴细胞免疫功能的影响作用。结果显示，沙葱总黄酮具有一定的体外抗氧化活性，相同浓度条件下超声法提取所得沙葱总黄酮的总还原能力及体外清除DPPH有机自由基的能力强于酶解法提取所得沙葱总黄酮，酶解法所得沙葱总黄酮清除羟基自由基的能力高于超声波提取法所得沙葱总黄酮。沙葱总黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用不敏感，对沙门氏菌的抑制作用为低度敏感，对绿脓杆菌没有抑制作用，并且两种提取方法所得沙葱总黄酮的抑菌作用无明显差别。两种提取方法所得沙葱总黄酮均能够促进绵羊外周血淋巴细胞增殖，上调绵羊外周血淋巴细胞IL2与IFN．Y基因的mR

6、NA表达水平，下调I【广4基因mRNA的表达水平，且超声法提取所得沙葱总黄酮效果优于酶解法提取所得沙葱总黄酮。(3)对超声波提取所得沙葱总黄酮使用聚酰胺柱层析进行梯度洗脱，分别得到蒸馏水、35％、55％、75％乙醇洗脱组分，并分别对各组分进行红外、紫外光谱检测及液质联用检测。综合三种检测结果分析得出，蒸馏水洗脱成分含有大量的单糖，35％乙醇洗脱组分除含有单糖外可能含有3。，4t．环氧基．7．O．5．甲氧基黄酮醇与7一O．5,4。．二甲氧基一3。．羟基黄酮。55％乙醇洗脱组分中含有糖类、芦丁、木犀草素．5’．O．葡萄糖．4．羟基苯丙酸、

7、异槲皮苷。75％乙醇洗脱组分中含有糖类、金合欢素及黄酮类物质。(4)对沙葱总黄酮不同洗脱组分的体外抗氧化、抗菌及对绵羊外周血淋巴细胞的免疫调节作用进行研究。结果显示沙葱总黄酮中35％乙醇洗脱组的抗氧化与免疫调节活性最强，其所含的3’，4’．环氧基．7．O．5．甲氧基黄酮醇与7-0-5，4’一二甲氧基．3。．羟基黄酮的活性结构是其抗氧化活性的关键基团，而其所含的C2-C3双键结构是其调节免疫活性的关键结构组分。而在沙葱总黄酮中起到抗菌活性的关键部位是55％乙醇洗脱组成分，这不仅与其结构组分中含有电荷密度较高的(24--0、CrOH和C7

8、．OH结构有关也与其连接有单糖或含有苷元的结构有关。关键词：沙葱黄酮；提取工艺；结构鉴定；抗氧化活性；抗菌活性；免疫调节活性StudiesonExtractionProcess，StructuralIdentificat