葛根提取物对神经根型颈椎病大鼠根性疼痛作用及机制的研究

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1、硕士学位论文葛根提取物对神经根型颈椎病大鼠根性疼痛的作用及机制研究硕士研究生：于林指导教师：谢炜摘要一、目的与意义颈椎病又称颈椎综合症(Cervicalsyndrome)，是颈部椎间盘、骨骼、软骨、韧带发生退行性变，继发性刺激或压迫周围或临近的脊髓、神经根、血管、软组织、交感神经等组织结构，并由此而引起各种不适的一组症候群。流行病学调查显示，颈椎病在我国成人中的患病率大约为3．8％"--17．6％。按现有人口保守推算，至少有5000万至1亿人正在受到颈椎病的折磨。神经根型颈椎病是颈椎病中发病率最高的一种类型，约占其总发病率的60％～70％。神经根

2、型颈椎病(cervicalspondyloticradiculopathy，CSR)是神经根受各种因素侵袭损伤而导致其支配区域感觉、运动及反射障碍而引发的以疼痛为主要临床表现的一种疾病。医学界最早关于颈椎病的概念，大多源于神经根型。神经根型颈椎病的主要症状为根性神经痛(RadicularNeuralgia，RN)。目前对神经根型颈椎病根性痛的确切机制尚不完全清楚，但机械压迫因素和生物化学因素在发病机制中的作用得到越来越多的认同。椎间盘退变引起的骨赘增生压迫神经根，引起无神经外膜保护的神经根产生以神经内水肿和缺血为主的病理改变【l’2】。大量文献表

3、明，退变的椎间盘及损伤的神经根存在多种炎性递质，如细胞因子、白三烯(LT)、肿瘤坏死因子(TNF)、免疫球蛋白和白介素(IL)等【31，机械性压迫与炎性刺激的协同作用造成神经根更严重的损伤【41。因此，保护和修复受损的神经根成为防治神经根型颈椎病根性痛的有效方法。目前对于神经根型颈椎病根性痛尚无有效的治疗中文摘要药物，多采用牵引、针灸、手法推拿按摩、理疗等综合治疗，但只能暂时缓解疼痛，病人依从性差。对于一些病情严重者可选择外科手术治疗，但受到适应症的限制，风险大，费用昂贵，还存在复发的可能。如何发挥中医药治疗神经根型颈椎病就成了摆在我们面前的课题

4、。本课题组根据神经根型颈椎病“多风、多寒、多湿、多瘀、多虚’’的特点，自拟“颈椎舒’’方临床运用多年取得满意的疗效。动物实验和临床研究提示，“颈椎舒"能改善微循环、降低血小板聚集率、降低血粘度、增加血管壁弹性、扩张血管，能显著改善神经根型颈椎病患者疼痛、麻木、僵硬、寒冷、肌肉萎缩无力等症状【5“’¨。葛根为方中君药之一，葛根素为葛根的主要有效成分，其化学名8-13．D．葡萄吡哺糖．4·，7．二羟基异黄酮【引。葛根素治疗神经根型颈椎病已有报道【9’101，研究证明，葛根素具有调节骨代谢‘111、改善血液循环【121、降低心肌耗氧量、降低血糖、防治高

5、血压及动脉硬化、保护神经细胞、抗肝脏毒性、抗炎、祛痰、解热、提高机体免疫力、抗茵、抗病毒等多种药理作用。为了研究葛根素治疗神经根型颈椎病根性痛的可能机制，探讨葛根素对受损的颈神经根的修复作用，本课题组从神经行为学、神经形态学和神经电生理学角度进行研究，既为了探讨葛根对神经根型颈椎病根性痛及其受损神经根修复的作用，也为明确中药复方“颈椎舒’’的疗效机制提供实验依据。二、方法与内容1．葛根药材的鉴定薄层色谱鉴定照薄层色谱法(附录V／B)试验，吸取上述两种溶液各101al，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，使成条状，以三氯甲烷．甲醇

6、．水(7：2．5：0．25)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱图相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。葛根中葛根素含量的测定根据2005版《中国药典(一部)》中规定，按照高效液相色谱法测定，葛根干燥品中葛根素含量不低于2．4％。2．葛根素最佳提取工艺的确定及质量控制标准的建立lI硕士学位论文2．1最佳提取工艺的确定以葛根素为指标，以料液比(14：1、16：l、18：1)g、提取时间(1、1．5、2)h、提取次数(1、2、3)次为考察因素，按L9(34)正交表进行正交试验，比较水提取法和乙醇提取

7、法，确定葛根提取的最佳工艺及质量控制标准2．2质量控制标准的建立按照最佳提取工艺做三批验证试验求得RSD值，计算平均浓度。3．模型的建立及干预所有大鼠在造模术前行左侧SLSEP检测，获取参考值。仿照文献【13】施行椎管插线造模手术，略作改进：以O．8cm长、直径0．55rnnl尼龙渔线制备成插线，C7椎板开窗后，分别沿脊髓纵轴插入至C7．T1，及C5．C7神经根处，部分重叠，牢固嵌入骨性椎管内。术中及术后死亡7只。余53只大鼠在术后第5天接受评价，筛选符合以下条件：①造模前后术侧E’．C6Lat的增长为0．2．0．4ms；②步态评分为2．3分，无

8、脊髓压迫症状，共47只大鼠入组。随机编号，使用excel均衡生成5个处理组，每组8只：生理盐水组、葛根提取物低、中、高剂量组、颈复康组。