禽巴氏杆菌ptfa基因原核表达载体的构建 毕业论文

《禽巴氏杆菌ptfa基因原核表达载体的构建 毕业论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、摘要禽巴氏杆菌ptfa基因原核表达载体的构建摘　要多杀性巴氏杆菌（PasteurellamultocidaP.m）是有荚膜的革兰氏阴性杆菌，属于巴氏杆菌科巴氏杆菌属。禽巴氏杆菌病（又称禽霍乱）是由巴氏杆菌所引起的家禽和野禽的一种急性、接触性、败血性疾病总称。近年来国内外学者的研究表明，菌毛是巴氏杆菌表面存在着一种比鞭毛更细、更短而直硬的丝状物，其化学组成是菌毛蛋白（Pilin）。它是禽多杀性巴氏杆菌的重要致病因子。菌毛在禽巴氏杆菌感染过程中与粘附有关。ptfa基因编码的蛋白是禽多杀性巴氏杆菌的菌毛蛋白，在机体抵抗禽多杀性巴氏杆菌

2、攻击中具有重要作用。本文通过已公布的菌毛蛋白ptfa基因的序列，设计了一对引物，以提取的巴氏杆菌基因组为模板，进行PCR特异性扩增出ptfa基因，将扩增得到的产物克隆到载体pET30a中，得到重组质粒pET30a＋ptfa转化到大肠杆菌DH5ɑ菌株的感受态细胞中，将转化形成的重组细胞进行涂布（含卡那霉素的LB平板）筛选，挑取平板上的单菌落进行扩培，对扩培液再次进行纯化，提取纯化细胞的质粒进行PCR扩增检验，将呈阳性的提取质粒进行测序，成功获取ptfa基因同时表明原核表达载体构建成功，为巴氏杆菌疫苗的研究奠定了基础。关键词：多杀性

3、巴氏杆菌，ptfa基因，基因组提取，原核表达载体II摘要ProkaryoticconstructionofexpressionvectorptfagenefromavianpasteurellamultocidaABSTRACTFowlcholera,whichpathogenispasteurellamutocida,isakindofacute、contagiousandsepticaemiainfectiondiseaseindomesticpoultryandwildbirds.Manystudieshaveshownt

4、hat,FimbriaeonthePasteurellasurfaceismoredetailed,straight,hardandshorterthantheflagellum,itschemicalcompositionisthepiliprotein(Pilin).Ititisanimportantpathogenicfactor.ofPasteurellamultocida.Fimbriaehasinfectionsontheprocessofpoultryfimbriaeandadhesion.theproteinwh

5、ichptfaencodedisthepilusofPasteurellamultocida.ithasanimportantroleinthebodyagainstavianPasteurellamultocida.Inthispaper,apairofprimersweredesignedaccordingtotheptfagenesequencepublished.ThePasteurellamultocidaP.mgenomewasextractedastemplateforPCRamplifiedspecificptf

6、agene.ThePCRproductwasrecoveredandclonedintotheclonevectorpET30a,andwastransformedintoE.colistrainDH5ɑcompetentcells.TherecombinantplasmidpET30a-ptfawasselectedbyKanamycin.PlasmidwasextractedandtestedbyPCRamplification.Theresultsshowthattheprokaryoticexpressionvector

7、wasconstructedsuccessfully.KEYWORDS：Pasteurellamultocida,ptfagene,genomicextraction,ProkaryoticexpressionvectorII目录目　录前言1第1章文献综述31.1多杀性巴氏杆菌概述31.2溶血性巴氏杆菌概述31.3多杀性巴氏杆菌毒力因子及免疫原的研究41.3.1荚膜41.3.2外膜蛋白51.3.3脂多糖61.3.4多杀性巴氏杆菌毒素61.4多巴氏杆菌重要基因的研究61.4.1荚膜合成基因61.4.2溶血基因71.4.3磺胺耐药基

8、因71.4.4toxA基因71.5本研究的目的和意义8第2章实验内容92.1实验材料92.1.1菌种92.1.2载体92.1.3主要试剂92.1.4分子生物学试剂92.2培养基及主要试剂配制92.2.1培养基配制92.2.2缓冲液配制102.2.3琼脂糖凝胶电泳