免疫学检测原理及临床应用课件

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1、免疫学检测原理及临床应用一、基于抗原抗体反应的检测方法㈠抗原抗体结合反应的特点1.高度特异性2.抗原抗体结合的带现象与可见性3.可逆性㈡影响抗原抗体反应的因素1.电解质2.酸碱度3.温度4.抗原和抗体的性质前带现象后带现象㈢抗原抗体反应的基本检测方法1凝集反应颗粒性抗原（如细菌、细胞）与相应抗体，在适当电解质存在的条件下，经过一定时间后出现肉眼可见凝集块，称为凝集反应凝集反应种类⑴直接凝集反应⑵间接凝集反应是将可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的载体上，使之成为致敏载体颗粒，然后与相应抗

2、体或抗原作用，在电解质参与下出现的凝集反应⑶间接凝集抑制反应将可溶性抗原与相应抗体预先作用，然后再加入致敏载体悬液，由于抗体已被可溶性抗原结合，因而致敏颗粒不发生凝集现象，称为间接凝集抑制试验2沉淀反应可溶性抗原（如细菌浸出液，组织浸出液和动物血清等）与相应抗体结合后，在电解质存在条件下，经过一定时间作用后，可出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应⑴单向扩散试验是一种定量试验，使抗原在含有抗体的琼脂介质中扩散，经一定时间后即可见抗原孔周围出现由抗原抗体复合物形成的沉淀环。沉淀环的直径与抗

3、原浓度成正比。故试验前应用已知不同浓度标准抗原制成标准曲线（纵座标为沉淀环直径，横座标为抗原浓度），可根据沉淀环直径的大小从标准曲线中查出待检样品中抗原的含量。临床上常用于测定IgG、IgM、IgA的含量⑵双向扩散试验抗原与抗体在琼脂介质中相互扩散，如抗原抗体相应且浓度比例适当，则在抗原抗体之间可出现白色沉淀线。一对相应的抗原抗体只能形成一条沉淀线；多种抗原抗体系统，测可形成多条沉淀线⑶免疫电泳⑷免疫比浊3补体参与的反应补体结合试验、溶血空斑试验4免疫标记技术免疫标记技术是指用荧光素、酶

4、、同位素或电子致密物质等标记抗体或抗原所进行的抗原抗体反应优点：特异、敏感、快速、能定性、定量甚至定位，且易于观察⑴免疫荧光法⑵酶免疫测定酶免疫技术是通过适当的酶促化学反应和免疫反应，使抗体（或抗原）与酶蛋白分子结合，形成酶标抗体（或抗原），该结合物保留免疫学活性和酶活性，因而既有抗原抗体反应特异性，又有酶促反应的特异性。酶分解底物后的显色深浅可反映标本中抗原或抗体的含量常用酶辣根过氧物酶、碱性磷酸酶*酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法用于测抗体包被抗原→加待测标本→加酶标抗体→加

5、底物→终止反应→测OD值双抗体夹心法用于测抗原包被抗体→加待测标本→加酶标抗体→加底物→终止反应→测OD值*酶联免疫斑点试验*BSA-ELISA⑶免疫组化技术⑷放射免疫测定法⑸化学发光免疫分析⑹免疫印迹法二免疫细胞检测㈠免疫细胞及其亚类计数㈡淋巴细胞功能测定1体外试验⑴淋巴细胞增殖试验⑵细胞毒试验⑶分泌功能测定2体内试验三免疫分子检测㈠免疫球蛋白测定㈡补体测定㈢细胞因子检测㈣CD分子、表面受体和黏附分子的检测㈤HLA分型