紫外吸收光度法鉴别和测定维生素 B 12 注射液

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1、紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12注射液【目的要求】1．掌握紫外分光光度计的基本结构及使用方法；2．掌握维生素B12注射液的鉴别和含量测定方法。【实验原理】1.紫外分光光度计的组成与结构紫外分光光度计主要由光源（D灯、W灯）、单色器（棱镜、光栅、滤光片）、吸收池、检测器（光电管、光电倍增管、光电池）以及信号放大处理和显示系统等部分组成，其基本结构和工作流程如同21-1所示。光闸光源单色器样品池检测器信号处理图21-1单光束紫外分光光度计的基本结构2.维生素B12的定性鉴别由于物质的性质和结构不同，物质对光的吸收是具有选择性的。维生素B12的吸收曲线反映了其化学结构的基本特征，分别在27

2、8nm、361nm和550nm波长处有三个吸收峰，因此可通过它的吸收光谱的特征，利用其特征吸收值之间的比值A361/A278和A361/A550进行定性鉴别，并了解维生素B12的纯度，药典规定：A361/A278和A361/A550的比值应分别在1.70~1.88和3.15~3.45之间。3.维生素B12注射液的定量分析1%由于维生素B12在361nm处的溶液吸收最强（E1cm,361nm=207），且干扰因素少，因此以361nm作为测量波长，在此波长下测量其溶液的吸光度A，采用吸光系数法直接测定浓度，按下式计算维生素B12的百分含量：1%AA4由A=ECl则C==×10=A×48.31

3、(μg/ml)1cm1%El2071cmA×48.31×n∴VitB(%)=×100%（n为稀释倍数）120.5【仪器与试剂】１.仪器TU1810紫外-可见分光光度计，1cm石英比色皿。２.试剂维生素B12对照品，维生素B12注射液（标示量0.5mg/ml）。【实验内容】1.对照品溶液和样品溶液的配制准确称取维生素B12对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL的溶液。精密吸取维生素B12注射液0.5ml于10ml容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，得到待测样品溶液（按标示含量稀释成25μg/ml的溶液）。2.吸收光谱的绘制与注射液的鉴别取对照品溶液进行光谱扫描（250~600nm），得到维生素

4、B12的吸收曲线，寻找吸收峰，扫描后可得到在278nm，361nm和550nm波长处出现的3个吸收峰，然后在以上3个吸收峰处测量维生素B12注射液的吸光度，并计算A361/A278和A361/A550的比值。3.维生素B12的定量测定根据吸收曲线选择最大吸收波长（在361nm或附近）作为测量波长，测量维生素B12样品溶液的A值，并计算其标示含量（在90~110%之间视为合格）。【注意事项】1.注意石英比色皿的操作使用；2.使用5联池时要注意比色皿在样品池中的位置，不可混淆；3.测定时不要打开仪器的样品池盖。【思考题】1．采用吸光系数法直接测定样品含量有何要求？2．利用其他组同学的实验结果

5、，比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、吸收峰波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解释。3．比较用吸光系数和校正曲线定量方法，你认为哪种方法好？为什么？IdentificationanddeterminationofvitaminB12intheinjectionbyUVspectrophotometryObjectives1．GraspthebasicconfigurationandtheoperationofUV-Visspectrophotometer;2．GraspthemethodofidentificationanddeterminationofvitaminB12

6、intheinjection.Principles1.ThebasicconfigurationofUV-VisspectrophotometerUVspectrophotometerismainlycomposedoflightsources,monochromator,samplecell,detectorandsignalprocessor.Lightsourcesusuallyemploydeuteriumlampforultravioletandtungstenlampforvisiblelight,whileprismandgratingaremostusefulmonoch

7、romator.Commonly,quartzandglassareusedtomakesamplecell.Photovoltaiccell,phototubeandphotomultipliertubehaveusedasdetectorsuccessively.Theconfigurationandoperationalprincipleofsingle-beamspectrophotometerareshownasfigur