吡格列酮在大鼠放射性肺纤维化中保护作用的研究

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1、万方数据·英文缩略语·5万方数据·论文·吡格列酮在大鼠放射性肺纤维化中保护作用的研究前言放射治疗是胸部恶性肿瘤的主要治疗方式之一，放射性肺损伤是胸部肿瘤放疗的常见不良反应。放射性肺纤维化则是放射性损伤的晚期并发症，它可导致呼吸困难，影响患者的生活质量，甚至导致呼吸衰竭，目前尚无特异性的肺纤维化治疗手段‘11。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是核激素受体超家族的配体活化的核转录因子，越来越多的证据表明自然和合成的PPAR7激动剂在体外都具有强大的抗纤维化作用，吡格列酮为合成的PPAR7激动剂【2】。本课题组前期的研究提示，血管紧张素II(angiotensinII)是放射性肺纤维化

2、形成的重要因素‘31。AngiotensinII的这种作用主要通过血管紧张素II1型受体fangiotensintypeII1receptor，ATlR)实现‘钔。本课题组研究提示【51，PPAR7作为一种保护性蛋白，在未用体外激动剂的情况下，PPA脚生理性升高不足以抑制致纤维化蛋白的活性。目前尚无大鼠放射性肺纤维化模型中PPA脚对ATlR的影响的研究。放射性肺纤维化目前尚缺乏有效的治疗方法，在前期研究证实血管紧张素II在放射性性肺纤维化中起重要作用的基础上，本文拟研究吡格列酮在放射性肺纤维化中的保护作用，以及对ATl受体表达的影响。实验材料与方法一、实验材料(一)实验动物SPF级Spr

3、agueDawley(SD)大鼠60只，雌雄各半，月龄3个月，体重178．2459，购置中国医科大学实验动物中心。6万方数据(二)仪器设备仪器名称生产厂家直线加速器oncor-H彩色超声诊断仪EUB一8500病理切片机RY-2235烘片机HL282光学显微镜4。C及．20℃冰箱．80℃深冻冰箱离心机RNA浓度测定仪eDNA反转录仪Real．timePCR扩增仪BiofugeStratos高速低温离心机电泳仪Bio．RadWesternBlot实验系统制冰机德国西门子公司日本日立公司德国LEICA公司上海合力实业有限公司日本OnMPUS公司中国海尔公司美国ThermoElection公司德

4、国Eppmdrof公司美国Bio．Rad公司瑞士Roche公司美国Sorvall公司美国Bio．Rad公司德国ZIGERA公司(----)实验试剂l、HE染色实验试剂4％中性甲醛固定液、AF液、75％乙醇、85％71醇、95％7,醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡、苏木素、盐酸酒精、1％稀氨水、伊红、中性树胶等，均由中国医科大学附属盛京医院中心实验室提供。2、Masson染色试剂Masson复合染色液：酸性复红1昏丽春红29、橘黄G29、25％醋酸300ml。2％苯胺蓝液：苯胺蓝2昏冰醋酸2ml、蒸馏水100ml、0．2％醋酸水溶液、5％磷钨酸、无水乙醇、二甲苯、中性树胶等，均由中国医科大学附属

5、盛京医院中心实验室提供。7万方数据3、免疫组织化学染色试剂(1)PBS液：购白北京中衫金桥生物技术有限公司。(2)PPAR吖多克隆抗体：购自美国SantaCruz公司，编号Sc．7273。(3)免疫组织化学染色试剂盒：购自北京中衫金桥生物技术有限公司，编号SP．9000。内容包括3％H202去离子水3ml、封闭用正常山羊血清工作液3ml、生物素标记山羊抗兔＼大鼠＼小鼠＼豚鼠IgG二抗工作液3ml、辣根酶标记链霉素卵白工作液(SABC)3ml。(4)浓缩型DAB试剂盒：购自北京中衫金桥生物技术有限公司，编号ZLI一9017。内容包括DABchromogen(20x)lml、DABsubst

6、rate60ml。4、Westernbolt试剂：(1)PPAR．Y多克隆抗体：购白美国SantaCruz公司，编号Se．7273。(2)Tris、APS、SDS、TEMED、Tween．20、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、丽春红购自美国sigma公司；SuperECLPlus超敏发光液、显影液及定影液购自北京尚柏生物技术有限公司。5、Real．timePCR试剂(1)RNA裂解液TRIZOL：购白日本Takara公司(大连宝生物公司代理)20m1×2。(2)eDNA反转录试剂盒：购自日本Takara公司(大连宝生物公司代理)，编号DRR037s。内容包括5xprimeSCriptTMBuf

7、fer(forRealTime)2009l、PrimeScriptmRTEnzymeMixI509l、oligodTPrimer(509M)509l、Random6mers(1009M)2009l、RNaseFreedH20lml、EASYDilution(forRealTimePCR)lml。(3)SYBR⑩PremixExT臼qTM(PerfectRealTime)：购自日本Takara公司(大连宝生物公司代理)，编号DDR04