普通小麦与羊草不对称体细胞杂交的研究

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1、山东大学硕士学位论文普通小麦与羊草不对称体细胞杂交的研究姓名：陈秀玲申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：夏光敏2002.5.18山东大学硕士学位论文中文摘要由长期继代的小麦济南177的胚性愈伤组织制备原生质体与继代5年的羊草悬浮系来源的原生质体在PEG诱导下进行融合。小麦愈伤组织来源的原生质体已不能再生愈伤组织，羊草原生质体也丧失了分化能力。羊草原生质体经强度为380uW／cm2的紫外线分别照射30sec、45sec、Imin后进行融合。(融合组合小麦(T)(+)羊草(L，UV30s)得到大量再生克隆，在增殖培养基上可以继续生长，经形态学、染色体观察、同工酶(酯酶、苹果酸脱氢酶、过氧化

2、物脱氢酶)及RAPD分析鉴定均为体细胞杂种细胞系，但5SrDNA间隔序列无小麦特征带。上述结果表明杂种细胞系的性质以及核基因组成偏向羊草(供体)。融合组合T(+)L(UV，45s)仅得到数个再生克隆，在增殖培养基上不能继代生长，逐渐变褐死亡。而融合组合T(+)L(UV，lmin)未得到再生克隆。对部分已鉴定为杂种的再生克隆进行胞质基因分析表明，线粒体特异探针杂交，多数杂种克隆具双亲特征带和新带，少数杂种仅有羊草的特征带及>新带。用叶绿体特异探针rbcl杂交，杂种具有双亲特征带和新带√本文讨论了紫外线辐射在不对称原生质体融合中的剂量效应，对杂种细胞生长和分化能力的影响，以及体细胞杂种中胞质基因的

3、重组与分离。本文为进一步研究提供了一定资料。关键词：小麦羊草不对称体细胞杂交，RAPD分析j胞质基因分析山东大学硕士学位论文ABSlRACIProtoplastsofcommonwheat(TriticumaestivumL．)CV．Jinan177originatedfromlongtermsubculturedcalliwerefusedwithprotoplastsofLeymuschinensissuspensionculturessubcultruedfor5yearsusingPEGmethod．Theprotoplastsof+wheatwerenotcapableofregen

4、eratingtocalliandwholeplants．TheprotoplastsofL．chinensisalsohadlosttheabilitytodifferentiate．Beforefusiontheprotoplastsof￡．chinensisirradiatedbyUVattheintensityof380IIW／cm2for30s，45s，Iminrespectively．ThefusioncombinationT(+)L(UV30s)producedgreatamountofregeneratedclonescapableofsubsequentgrowthwhich

5、wereidentifiedashybridsbymorphologicalandchromosomeobservationaswellasisozymepauem(esterase，malicaciddehydrogenaseandperoxidase)andRAPDanalysis．However,the5S—rDNAspacesequenceanalysisshowednowheatcharacteristicbands．Thereforetheaboveanalysisinawholedenotedclonethenatureofthehybridclonesandtheirnucle

6、argenometendedto￡．chinensis．ThefusioncombinationTf+)L(UV45s)producedonlyseveralregeneratedcloneswhichcouldnotcontinuetogrowfurtherandturnedtobebrownanddiedgradually,andincombinationT(+)L(UVlmin)noregeneratedclonesweregained．ForflpartofthehybridincombinationT(+)L(UV30s)，cytoplasmicgeneanalysiswerecar

7、riedOUt．Hybridizationwithspecific．probeformitochondriagenome，mayorhybridcloneshadcharacteristicbandsofbothparentsandnewbands，minorofthemhadmerelycharacteristicbandsof￡chinensisandnewbands．Usingspecifi