新型ampk激活剂hh-009诱导的抗胶质瘤作用及其机制研究

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1、学校代码:10285学号:20134221147SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文(学术学位)新型AMPK激活剂Hh-009诱导的抗胶质瘤作用及其机制研究IdentificationandcharacterizationofanovelAMPKactivatorwithpotentanti-gliomaefficiency研究生姓名杨传来指导教师姓名刘春风曹聪专业名称神经生物学研究方向肿瘤生物学所在院部医学部神经科学研究所论文提交日期2016年4月万方数据新型AMPK激活剂Hh-009诱导的抗胶质瘤作用及其机制研究中文摘

2、要I万方数据中文摘要新型AMPK激活剂Hh-009诱导的抗胶质瘤作用及其机制研究II万方数据新型AMPK激活剂Hh-009诱导的抗胶质瘤作用及其机制研究中文摘要新型AMPK激活剂Hh-009诱导的抗胶质瘤作用及其机制研究中文提要研究目的：神经胶质瘤（简称胶质瘤）是一种常见的原发性颅内恶性肿瘤，其特点是发病率和死亡率高。目前胶质瘤的常规治疗方法效果较差，患者的五年生存率低。现有的胶质瘤化疗药物（替莫唑胺等）由于毒性较大，且容易产生化疗抗性。因此，开发一种更加有效的胶质瘤化疗药物迫在眉睫。本项目旨在观察我们开发的新型磷酸腺苷活化的蛋白激

3、酶（AMPK）激活剂Hh-009体内、外抗胶质瘤细胞的作用，解析作用的分子机制。研究方法：a)利用MTT分析检测Hh-009对胶质瘤细胞增殖和存活的影响，集落形成实验检测Hh-009对胶质瘤细胞增殖的作用。b)TrypanBlue染色分析检测细胞死亡，AnnexinV/PI双染法对细胞进行染色，用流式细胞仪检测细胞凋亡。用碘化丙啶对细胞染色，流式细胞仪检测细胞周期。c)Westernblotting检测AMPK、AKT-mTOR、EGFR/PDGFR等信号通路活化水平的改变，同时检测肿瘤细胞自噬相关蛋白。通过荧光显微镜检测LC3B-

4、GFP表达。d)构建裸鼠U87细胞移植瘤模型，腹腔注射给予不同浓度的Hh-009，电子天平称量小鼠体重、用游标卡尺测量肿瘤大小。分离肿瘤组织及肿瘤周围正常组织，通过免疫组化检测PDGFR表达水平。研究结果：a)细胞活性实验结果表明Hh-009浓度依赖性地抑制胶质瘤细胞存活；集落形成实验证明Hh-009浓度依赖性地抑制胶质瘤细胞增殖。b)实验结果证明Hh-009诱导胶质瘤细胞死亡、细胞凋亡。此外，还能将周期阻滞在有丝分裂S期。III万方数据中文摘要新型AMPK激活剂Hh-009诱导的抗胶质瘤作用及其机制研究c)Westernblott

5、ing结果揭示Hh-009介导胶质瘤细胞AMPK活化、诱导细胞发生自噬，阻断胶质瘤细胞AKT-mTOR信号通路，导致胶质瘤细胞PDGFR、EGFR等生长因子受体表达下调。d)裸鼠移植瘤实验证明Hh-009显著抑制在体胶质瘤生长，且随着Hh-009的使用浓度增加，肿瘤抑制率升高。结论：Hh-009是一个新型的AMPK激活剂，激活AMPK的同时，阻断AKT-mTOR信号通路、下调生长因子受体PDGFR、EGFR表达。我们体内、外实验证明Hh-009对神经胶质瘤有明显的抑制作用。关键词：神经胶质瘤；Hh-009；磷酸腺苷活化的蛋白激酶（A

6、MPK）；新型AMPK激活剂作者：杨传来指导老师：刘春风曹聪IV万方数据IdentificationandCharacterizationofanovelAMPKactivatorwithpotentanti-gliomaefficiencyAbstractIdentificationandCharacterizationofanovelAMPKactivatorwithpotentanti-gliomaefficiencyAbstractBackground:Gliomaisaprimaryintracranialneuraltu

7、mor.Currentchemotherapytreatmentneedstoovercometheblood-brainbarrieranddrugresistance.Despiteprogressingliomaclinicaltherapyoptions,suchassurgery,radiation,chemotherapy,andcombinedmodalities,theprognosisformalignantgliomapatientsremainsdismal.Thus,itisnecessarytodevelo

8、pnovelandpotenttherapeuticagentsforthetreatmentofglioma.EmergingevidencehasrevealedthatAMP-activatedproteinkinase(AMP