拟南芥nced4基因和紫花苜蓿msfta基因的克隆及功能鉴定

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1、内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：蠹遗日期：圣呈!缱』旦至因．}内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定

2、，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日摘要本研究以紫花苜蓿和拟南芥为研究对象，主要利用基因工程、转基因技术和表型分析，分析MsFTa和NCED4的功能，为相关功能基因研究及

3、紫花苜蓿基因的转基因应用奠定了基础。主要试验结果如下：1．利用PCR技术从野生型拟南芥中克隆出NCED4基因，全长1785bp，编码595氨基酸，不含有内含子，从拟南芥中分离出的NCED4蛋白与其他物种的同源蛋白相比，具有较高程度的同源性和相似的保守区，且不存在信号肽。2．并通过DNA重组技术将其连接到pBI121载体上，成功构建植物表达载体pBI-NCED4；将表达载体转化到感受态农杆菌株GV3101中，利用花序浸泡法获得具有卡那霉素抗性的转基因拟南芥植株。对再生植株进行检测表明，目的基因转入拟南芥基因组中，并在转基因拟南

4、芥中成功过量表达。基因功能与植物体内脱落酸的调控有关。3．实时定量分析显示，NCED4基因在拟南芥不同组织中存在着明显的差异性表达，在叶片中表达量最高，在花中表达量较低；NCED4基因表达量受外援激素的影响较为明显：在一定脱落酸的作用下，基因相对表达量随着时间的累积先升高后降低，而在一定量赤霉素的作用下，基因相对表达量随着时间的累积降低。4．利用PCR技术从紫花苜蓿中克隆出MsFTa基因，全长528bp，编码176氨基酸，从紫花苜蓿中分离出的MsFTa蛋白与其他物种的同源蛋白相比，具有较高的同源性和相似的保守区，不存在信号肽

5、。5．构建植物表达载体pBI—MsFTa，并最终获得具有卡那霉素抗性的转基因拟南芥植株。对再生植株进行检测表明，目的基因转入拟南芥基因组中，并在转基因拟南芥中成功过量表达。基因功能与植物体开花调控有关。6．MsFTa在所选的组织中(包括根，茎，叶，花)均有表达，但在花器官中表达量最高，根中表达量较低；而通过赤霉素处理，MsFTa基因在外源赤霉素的诱导及低温处理条件下，gsFTa基因表达量呈现明显变化。给予这两点，可以做出推测：MsFTa可能在赤霉素调节和春化调节的植物丌花上起调控的作用。关键词：拟南芥；紫花苜蓿：NCED4；

6、脱落酸；MsFTaCloningandCharacterizationofArabidopsisthalianaNCED4GeneandMedicagosativaL．MsFTaGeneAbstractInthisstudy，wecharacterizedtheMsFTagenefromMedicagosativa(alfalfa)andNCED4genefromArabidopsisthalianabygenegeneticengineering，transgenictechnologyandphenotypeanalys

7、is．Theresultsareshowedbelow：1．A1785一bpgenomicDNAsequencenamedNCED4wasobtainedbyPCR．Itencoding595aminoacidsanddoesnotcontmnintrons，NCED4proteinisolatedfromarabidopsisthalianacomparedwithhomologousproteinofArabislyrataL．，thegenehavehighhomologyandsimilarconservativea

8、rea，thereisnosignalpeptide．2．NCED4genewasinsertedintoplasmidpBI121withDNArecombinationtechnology，resultingaplantexpressingvectorpBI-NCED4．Transge