常染色体及x染色体str在乳腺癌及妇科肿瘤组织中的变异分析

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2、以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。l研究生签名：孙矾蜗导师签章：够弛，＼／矽，驴年争月，日目录lIillitllll111111111111111111111lUllllIIlY2582271中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5英文缩写．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10研究论文常染色体及X染色体STR在乳腺癌及妇科肿瘤组织中的变异分析前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯+⋯⋯⋯⋯⋯11翮吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ll材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52综述肿瘤患者来源生物学检材的法医学

4、鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：⋯．67个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯68中文摘要常染色体及X染色体STR在乳腺癌及妇科肿瘤组织中的变异分析摘要目的：在法医学实践中常会遇到一些特殊案例，肿瘤组织(通常为甲醛固定石蜡包埋组织)成为唯一的参照样本。然而肿瘤组织存在STR变异，使同一个体肿瘤组织与正常组织分型不一致。本研究旨在探讨妇科肿瘤组织和乳腺癌组织的常染色体和X染色体STR变异类型和规律，为此类肿瘤组织在法医学实践中的应用奠定基础。方法：1样本采集：分别采集经病理学

5、诊断明确的63例乳腺癌和62例妇科恶性肿瘤患者的肿瘤组织和癌旁正常组织，以及lO例妇科良性肿瘤组织及正常对照组织。其中40例妇科肿瘤样本包含对应的外周血。同时记录患者的年龄、肿瘤类型、组织类型、临床分期、分化程度等信息。2DNA提取：分别用动物组织／细胞基因组DNA提取试剂盒和石蜡包埋组织DNA提取试剂盒提取妇科肿瘤和乳腺癌的肿瘤组织、癌旁正常组织DNA，用血液基因组小量提取试剂盒提取血液基因组DNA。用ND．1000蛋白核酸定量仪定量。3STR分型：采用PowerPlex21System和ArgusX．12试剂盒分别扩增DNA，共33个STR基因座。

6、ABI3130GeneticAnalyzer对PCR产物进行电泳分型，使用GeneMapperTMv3．2分析结果，得到肿瘤组织、正常组织和血液的STR分型。对比同一个体正常组织与血液的DNA分型和同一个体的肿瘤组织与正常组织的DNA分型，记录STR变异位点和类型。4STR变异验证：用重复实验、不同试剂盒间相互验证和单基因座扩增方法验证STR变异的发生并对等位基因测序确认其发生的机制。5显微切割：挑选存在STR变异的部分妇科肿瘤组织进行显微切割，对切取的肿瘤细胞和正常间质提取DNA，扩增并电泳分型；分别对比肿瘤细胞、正常间质细胞、肿瘤组织、正常组织DN

7、A分型。6统计学分析：应用Excel、SPSSv16．0软件对上述实验结果进行统计学分析，用计数法分析各种变异类型的个体水平STR变异率和基因座水平STR变异率，用Z检验比较不同肿瘤类型、组织类型、分化程度及中文摘要临床分期的STR变异差异及妇科肿瘤和乳腺癌组织STR变异的差异。结果：1妇科肿瘤组织STR变异比较妇科肿瘤患者血液样本和正常对照组织的STR分型结果发现，血液样本与正常组织的STR分型一致，证实外周血液的STR分型无变异。在妇科肿瘤组织中，观察到增加等位基因(additionalalleles，Amd)、新等位基因(newalleles，A

8、new)、完全杂合性丢失(completelossofheterozygosity,LOH)和