x染色体str基因座在同胞亲缘鉴定中的应用

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1、X染色体STR基因座在同胞亲缘鉴定中的应用作者：吴淑珍，林刻智，张洪勤【摘要】目的:探讨X染色体STR基因座独特的遗传方式在同胞亲缘关系鉴定中的应用。方法:应用聚合酶链式反应（PCR）、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显带技术对1名未知女性个体与3名已知同胞兄妹的22个基因座进行分型，并对线粒体D环高变区作序列测定。结果:得到具有排除价值的2个X染色体基因座（DXS7132、DXS6804）和4个常染色体基因座（D1S549、D2S441、D16S539、D5S818），否定了未知个体与3名同父同母兄妹的亲缘关系。结论:

2、X染色体基因座在男性的基因组中呈单倍型形式存在，特别适用于法医学实践中在父母缺如情况下姐妹之间的亲缘鉴定。【关键词】法医物证学；X染色体；短串联重复序列；同胞亲缘鉴定Abstract:Objective:TostudytheapplicationofspecificgeicpatternofX-chromosomeSTRlociinsiblings'identification.Methods:22STRlociofinederasechainreaction(PCR),PAGEandsilverstaining

3、technique,andthehypervariableregionofthemitochondrialD-looposomeSTRloci（DXS7132、DXS6804）andFourautosomalSTRloci（D1S549,D2S441,4D16S539andD5S818）havebeenfound,osomeSTRlociexistinthemalegenomeintheformofhaploid,osome;shorttandemrepeats;siblings'identificationX染

4、色体短串联重复序列(shorttandemrepeats,STR)广泛分布于真核基因组中，高度稳定且具有高度多态性，在男性的基因组中呈单倍型形式存在，遗传方式独特--父亲的等位基因只能遗传给女儿，所以它具有一些常染色体遗传标记无法比拟的优点，特别适用于法医学实践中在父母缺如情况下姐妹之间的亲缘鉴定，这种独特的遗传方式已引起了一些法医工作者的注意[1，2]。1材料和方法1.1同胞关系鉴定的案例由律师事务所委托,对一位未知女性个体与3位已知同胞兄妹之间是否存在同胞亲缘关系进行鉴定。1.2样本每位当事人采静脉血0.5m

5、l，用5%EDTA抗凝，于-20℃冰箱冻存。1.3STR基因座的检测取未知个体（1号）和三名同胞兄妹（2、3、4号）的血样，采用Chelex-100快速法[3]提取基因组DNA后进行扩增:94℃预变性3min，94℃50s，58℃40s，72℃40s，34个循环，72℃末次延伸10min，4℃保存。检测位点包括DXS7132、DXS6804、DXS6799等3个X染色体STR基因座和D6S477、D1S549、D3S1754、D12S391、D12S375、D18S865、D18S535、D7S2846、D16S

6、539、D3S1358、D8S1179、CSFIPO、VWA、D5S818、D19S400、D18S1364、D13S317、D2S441、D20S85等19个STR基因座。扩增产物经6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染显示电泳谱带，用标准等位基因Ladder确定其基因型。1.4线粒体D环高变区DNA序列测定将1号与2号的线粒体D环高变区DNA经PCR扩增和产物纯化后，委托上海Sangon用双脱氧终止法在ABI公司的3730测序仪上测定序列。2结果2.1所检测的22个STR基因座分型结果见表1，两个违反遗传规律

7、的X染色体基因座分析见表2；图1为22个STR基因座中的12个基因座，其中包含6个对于本案亲缘关系的分析判断具有重要价值的基因座。2.2比较1号与2号在线粒体D环高变区16020～16423位置上的DNA测序结果，共检出11处碱基序列不相同（表3），仅16217～16327片段上就检出5处碱基序列不同（图2），从而排除两者来自同一母系的可能性。3讨论目前用于判断同胞亲缘关系的方法有常染色体和性染色体STR基因座多态性分析、线粒体测序。常染色体STR基因座具有种类多、分布广、高度多态性、易于检测等优点，但在进行同胞

8、关系鉴定时，由子女的基因型反推父母的基因组合时，至少需提供3名或3名以上子女的样本作参照[4]。如本文提供的样本是1个未知个体和3个已知同胞兄妹，检测19个常染色体STR基因座，反推已知同胞兄妹父母的基因型，共检出具有排除价值的4个基因座：D1S549、D2S441、D16S539、D5S818基因座。根据德国亲子鉴定专家协会认定亲权关系的标准，排除亲权关系应有3个或3个