小麦铁超氧化物歧化酶(fesod)基因的克隆和表达功能分析

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1、万方数据独创性声明本人声明所呈盅0学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：丝』蛰签字日期：zol绛钼舶学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全J，解安徽农业大学自关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可以

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3、化酶(SOD)是清除植物体内活性氧的一种重要抗氧化酶类。研究发现，植物体内SOD酶活性的高低和植物的抗逆性密切相关，而且过表达SOD基因能明显提高植物对盐胁迫的抵御能力。本论文选取小麦烟农19为材料，采用RACE技术克隆出小麦FeSOD基因，并进行序列分析；构建原核表达载体，在大肠杆菌中表达，并优化了诱导表达条件；用荧光定量PCR技术分析该基因在不同逆境胁迫下的表达差异。研究结果如下：1．通过简并引物扩增和RACE技术，克隆出小麦FeSOD基因。小麦FeSOD(GenBank注册号：JX398977)全长为1397bp，开放阅读框长594bp，推测编码197个氨

4、基酸，分子量约为22．8KDa，等电点(PI)为5．382，其氨基酸序列与玉米、水稻等物种具有高度的同源性。2．根据获得FeSOD基因序列设计引物扩增编码区，并在引物上引入NotI和BamHI酶切位点。构建原核表达载体pETDuetl／FeSOD，并转化大肠杆菌E．coliRosetta(DE3)进行诱导表达。经SDS—PAGE电泳检测发现蛋白条带大小与预期一致，WesternBlot成功检测到重组蛋白，目的蛋白成功表达。通过优化IPTG浓度、诱导时间和诱导温度确定重组菌最佳诱导表达条件为0．5mmol／L的IPTG，诱导5小时，37。C。3．通过荧光定量技术，

5、分析小麦FeSOD基因不同逆境胁迫下的表达差异。结果表明：在逆境胁迫下，FeSOD基因的表达量大体呈现先上升后下降的趋势。在37℃高温，4"C低温，不同的盐浓度，300mmol的盐，30％的PEG．6000和100“molABA胁迫下，FeSOD基因的表达量分别在3h、lh、200mmol、6h、48h和24h时最高，分别为对照的34倍、4．5倍、4．3倍、5．8倍、13．5倍和3．3倍，均达到显著水平。关键词：小麦，铁超氧化物歧化酶，克隆，原核表达，荧光定量万方数据AbstractPlantswillproducemanyharmfulfreeradicals

6、intheprocessofplantgrowthanddevelopmentwhenavarietyofenvironmentalstresssubjecttoplant．Atpresent，cultivatingnewcropvarietiesresistanttostressbyisolatingplantdefensegenesthroughbiotechnologymethodsandthenlertingitexpressintransgenicplants，hasbecomeaneffectivewaytoincreasecropyield．Sup

7、eroxidedismutase(SOD)isanimportantantioxidantenzymewhichCanclearreactiveoxygenspeciesinplant．TherearesomestudiesfmdingthatSODactivitylevelinplantsWascloselyrelatedtoplantstresstolerance，andoverexpressionofSODgenecarlsignificantlyimproveplantresiliencetosaltstress．hlthispaper,thewheat

8、yangnong19Wa