小鼠胃肿瘤细胞的力学特性研究

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1、万方数据沈阳大学硕士学位论文论文题目：_：臣声肿烨卸胆印力学弩擘研窖作者：孙利利指导教师：兰堡坚塾垄协助指导教师：——单位：鎏堕奎堂论文答辩日期：2014年12月19日学位授予单位：沈阳大学单位：万方数据AMaster’SThesisinZoologyResearchesontheMechanicalcharacteristicsofthegastriccancerceHsinmiceCandidate：SunLiliSupervisor：ProfessorMaDeshunCollegeofBiologyScienceandEngineeringShe

2、nyangUniversityDecember19，2014万方数据独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得沈阳大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。签名：坠型圣!1日期：22』生：12：丝关于论文使用授权的说明本人完全了解沈阳大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；

3、学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。(保密的论文在解密后应遵循此规定)万方数据摘要细胞牵引力(CellTractionFol℃e)：是细胞作用于细胞外基质的力，它是一个重要的物理参数，涉及许多复杂的信号转导通路，对细胞的增殖、分化、信号转导、迁移、凋亡具有重要的调节作用，与诸多严重疾病的发生发展密切相关。肿瘤细胞与正常细胞相比，其特性表现出许多差异，目前关于此方面的报道还不多见。因此，本试验对小鼠胃肿瘤细胞在诱导分化前后的力学特性变化进行了比较研究，试图探索细胞牵引力在癌变的过程中的变化机制。方法与结论如下：1．

4、小鼠正常胃细胞与胃肿瘤细胞的培养。从小鼠体内分离正常胃组织，采用消化法获取小鼠胃细胞，置于C02培养箱中培养。培养3~4天后用倒置显微镜观察细胞生长状态，并更换培养液，弃去未贴壁的细胞。待细胞形成较好的细胞集落时扩大培养，每隔3d传代。选取生长情况较好的细胞制成细胞爬片，其余细胞继续培养。小鼠胃肿瘤细胞在体内建模后，采用消化法获取肿瘤细胞，同样置于C02培养箱中培养。根据长势情况每隔3d进行传代，根据试验需求制各相应的细胞爬片，其余细胞继续培养备用。2．鬼笔环肽染色对微丝的特异性染色。利用鬼笔环肽可与微丝特异性结合的特点，对细胞骨架中的微丝进行标记，以

5、观察小鼠胃肿瘤细胞诱导分化前后细胞内微丝分布形态的变化。结果显示诱导分化前的小鼠胃肿瘤细胞微丝较为稀疏，呈不规则的分布方式，相互交织成网状，并且处于一种扭曲和包含能量的状态，而经过诱导分化后的细胞微丝较为密集，扭曲消失，排列有序，能量得到释放。这表明细胞癌变以后，细胞骨架发生了较大的改变。3．a．SMA蛋白的检测。利用荧光抗体染色技术以及蛋白质印迹法检测了小鼠胃肿瘤细胞诱导分化前后q～平滑肌肌动蛋白含量的变化，以小鼠正常胃细胞作为参考。结果发现，诱导分化前的小鼠胃肿瘤细胞中Ⅱ．SMA蛋白表达含量较低，并且相对松万方数据散。而诱导分化后的伍．SMA蛋白表

6、达含量较高，并且相对密集，其含量更加接近小鼠正常胃细胞的ot-SMA蛋白的表达量。4．细胞牵引力的测定。利用CTFM(CdlTractionForceMicroscopy)法，即显微镜追踪法测量细胞牵引力。结果显示：小鼠胃肿瘤细胞诱导分化前后的牵引力变化十分显著，均方根值由279pa增加到565pa，增大了一倍左右。细胞投影面积的平均值也相应增大，由690urn2增加到963um2，大约增加了39．6％。小鼠胃肿瘤细胞的最大牵引力由1400pa增加到1800pa。细胞在基质上留下的位移变化也是很显著，最大值由原来的2．2l,lln上升到了2．5urn。

7、关键词：细胞牵引力，小鼠胃肿瘤细胞，诱导分化，细胞微丝，a-SMA蛋白Ⅱ万方数据ResearchesontheMechanicalcharacteristicsofthegastriccancercellsinmiceAbstractCellTractionForce(CTF)istheforceexertedontheextracellularsubstratebythecell，anditisanimportantphysicalparameter．CTFinvolvesmanycomplexsigrlaJ廿ansducfionpathways．I

8、tplaysanimportantregulationroleoncellproliferat