dab2ip在胰腺癌中的异常表达及其意义的研究

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文DAB2IP在胰腺癌中的异常表达及其意义的研究ThestudyfortheabnormalexpressionofDAB2IPandits课题来源：significanceinpancreaticcancer学位申请人段伊帆导师姓名李子俊教授专业名称内科学(消化病系)培养类型专业型培养层次硕士所在学院第二临床学院2013年5月15日广州f嘲嬲DAB21P在胰腺癌组织中的异常表达及其意义的研究硕士研究生：段伊帆指导老师：李子俊教授摘要背景胰腺癌是目前已知的恶性度最高的肿瘤之一，由于缺乏有效的早期诊断手段，外科切除率低；而保守治疗如

2、化疗和放疗的疗效也不佳，5年总体生存率不到5％。目前尚无一种理想筛选早期胰腺癌的肿瘤标志物，而且已报道的可用于胰腺癌的靶向药物厄洛替尼、西妥昔单抗、贝伐单抗疗效并不尽人意。因此探索胰腺癌的新的诊断和治疗靶分子显得尤为重要。近年来针对胰腺癌相关细胞信号通路的研究愈来愈深入，与胰腺癌相关的细胞信号通路包括：RAS．RAF．MAPK通路、P13K／AKT通路、NF—rB通路、EGFR通路、TGF·B通路、WNT通路、Hedgehog(Hh)通路、Notch通路、STAT通路以及黏蛋白信号通路等。这些信号通路都可以影响肿瘤细胞增殖或凋亡，在肿瘤发生、发展中发挥重要的作用

3、。其中RAS信号通路是胰腺癌发病机制中主要通路之一，也是本实验主要探讨的信号通路。RAS蛋白是RAS基因表达产物，是由190个氨基酸残基组成的小的单体GTP结合蛋白，具有GTPase活性，分布于质膜胞质一侧，共有三种：H．RAS，N．RAS，K．RAS。通常情况下，RAS存在着两种循环状态，失活的RAS．GDP状态和活化的RAS．GTP状态。RAS．GEFs和RAS．GAPs是能够调节这两种循环状态的两类分子。RAS—GEFs促使R_AS．GDP转化为活化状态的RAS．GTP，开摘要放RAS信号通路；而RAS—GAPs的作用正好相反，它通过增加RAS蛋白内在的G

4、TPase活性，水解RAS．GTP形成RAS—GDP非活性形式，关闭RAS信号通路实施负调控作用。而RAS基因突变后，其内在GTP酶活性丧失或者蛋白分子构象会发生改变，失去与RAS—GAP的结合能力，R．AS蛋白始终以RAS—GTP活化形式持续不断地启动和放大细胞内信号通路，引起肿瘤不断增殖。相比之下，RAS．GAP与野生型RAS的亲和力更高，所以RASGAP仅在KRAS野生型的肿瘤中发挥作用。而当RAS．GAP表达缺失或降低表达时，也可以活化RAS信号通路，导致细胞生物学行为的异常。尽管胰腺癌以Ⅺ认S突变型为主，但对于KRAS野生型肿瘤，近年来相关研究报道较少

5、。野生型RAS及它所调控的RAS信号通路在肿瘤发生发展中的作用机制尚不十分清楚。最近有文献报导在这类肿瘤中同样存在RAS蛋白过度活化以及RAS信号通路的调节异常。因此推测其原因可能与RAS基因表达的抑制物如RAS—GAP的下调或其作用缺失有关。目前已经发现的RAS．GAPs总共有16种：DAB2IP,RASALl，RASAL2，RASAL3，RASA1，RASA2，RASA3，RASA4，IQGAPI，IQGAP2，IQGAP3，SⅥ町GAPl，GAPVDl，ARHGAP5，G3BPl，NFl。近年来关于RASGAP与肿瘤之间联系的研究引人注目。现有研究表明DA

6、B2IP在肝癌、前列腺癌及肺癌中表达下降，并具有肿瘤抑制功能，被认为是一种抑癌基因。但DAB2IP在胰腺癌中的表达水平以及在胰腺癌发生发展中的作用目前尚不清楚。目的检测胰腺癌细胞中RAS．GAPs的表达谱，筛选出在KRAS野生型和突变型细胞中表达差异显著的DAB2IP作为研究靶分子。再进一步检测DAB2IP在胰腺癌细胞和胰腺癌组织中的表达水平，探讨其在胰腺癌中的可能作用和临床意义，随后通过下调KRAS野生型胰腺癌细胞中的DAB2IP表达水平，进一步验证其在KRAS野生型胰腺癌发展中可能起的作用，从而阐明DAB2IP在胰腺癌发生发展过程中可能存在的分子机制，为胰腺

7、癌诊断与治疗寻找到新的靶分子。II硕士学位论文方法1．所有胰腺癌细胞(KRAS野牛型：Bxpc．3；KRAS突变型：Capan．2，Swl990，CFPAC．1，Aspe．1，Panc．1)及正常胰腺导管上皮细胞(H6C7)均购自ATCC(美国模式培养物集存库Americantypeculturecollection)以及上海细胞库，添加各自适宜的培养基放置于374C，5％C02及适宜湿度的无菌专用细胞培养箱中培养。取生长状态良好无污染的对数生长期细胞，采用Trizol(LifeTechnologies公司)提取细胞总RNA。利用提取的纯度较好的RNA为模板通过

8、逆转录获得cDNA，逆转