ercc1、rrm1在非小细胞肺癌中表达对术后吉西他滨2f顺铂方案辅助化疗受益的预测

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1、硕士学位论文第二章材料与方法研究的入选标准及剔除标准：入选标准：①非小细胞肺癌患者包括鳞癌、腺癌、腺鳞癌；②病理分期为II、Ⅲ、Ⅳ期；③手术为完全切除或不完全切除(非剖胸探查术)；④行化疗者化疗方案必须是吉西他滨／顺铂方案；⑤有详细具体的联系方式。剔除标准：①伴有其他恶性肿瘤病史；②术后三个月内死亡；③术前行新辅化疗；④在外院行非GP方案化疗；2．收集原始资料：随机抽取符合入选条件的我院2000年1月至2006年6月行手术治疗的非小细胞肺癌病例68例，详细记录每位患者各项个人信息和临床资料。个人信息包括姓名、年龄、性别、吸烟状况、详细地址、联系电话、身份证

2、号码；临床资料包括住院号、住院时间及住院次数、手术日期、肿块部位大小、周边侵犯情况、肿块切除彻底与否、淋巴结大小、淋巴结部位、淋巴结清扫情况、病理报告中的病理类型、分化程度、各组淋巴结转移情况、病灶切缘情况、术后治疗情况、最后一次住院时间。3．整理资料：肺癌的组织病理学归类采用2004年世界卫生组织公布的《肺及胸膜肿瘤组织学分类修订方案》。TNM病理分期参照1997年国际抗癌联盟(UICC)公布的肺癌国际分期进行。手术彻底程度和性质参照2007年《中国肺癌临床指南》中的所列分类进行。依据病例资料建立数据库。4．病例随访：追踪患者出院后治疗情况、生存状况、复

3、查情况、及死亡病例的死亡原因(排除肺癌复发和肺癌引起的并发症以外的死亡原因)和死亡时间。随访方式及生存时间计算采用电话和通信形式随访。手术后生存时间计算起点为手术当日，终点为病人死于肺癌复发转移或肺癌引起的并发症日期。20072硕士学位论文第二章材料与方法年7月1日为观察终止日期，以月为单位。截尾数据为死于与肺癌无关疾病或者到观察终止日期未出现终点事件。5．NSCLC肿瘤组织中ERCCl、RRMl表达的检测：5．1实验材料在病理科调取有随访记录病例的存档蜡块切片，每个病例选取肿瘤实体部分切4张白片。5．2主要仪器与材料电热培养箱303-4上海金沪电热仪器联

4、营厂光学显微镜OlympusDX40．烤片机HI1220LEICA湿盒格兰仕1000W微波炉5．3试剂及配剂RRMl山羊抗人多克隆抗体原液(SC一11733SantaCruz公司)ERCCl小鼠抗人单克隆抗体原液(sc一17809SantaCruz公司)SP-9000通用型二抗试剂盒SP-9002抗山羊二抗试剂盒DAB北京中杉公司其它试剂包括PBS缓冲液、70’loo％乙醇、二甲苯、3％双氧水、蒸馏水、苏木素复染剂、封片剂5．4免疫组化方法免疫组化技术采用SP法。步骤如下：(1)60℃烘片1小时，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化；(2)3％H。0：阻断灭活内源

5、性过氧化物酶：PBS冲洗3X5mim(3)抗原修复：0．01M枸橼酸缓冲液(PH6．0)微波炉中高档修复3分钟，自然冷至室温。PBS冲洗3X5min。(4)相应的封闭血清工作液封闭，37℃10min，倾去不洗．(5)滴加一抗4"C冰箱孵育过夜，PBS冲洗3XSmin(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照，已知阳性染色的肺癌组织作阳性对照)硕士学位论文第二章材料与方法(6)滴加生物素标记二抗，37。C孵育20min，PBS冲洗3X5min：(7)滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37*C孵育20min，PBS冲洗3X5min：(8)DAB染色，自来水充

6、分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。5．5免疫组化结果的评判·免疫组化强度评判由一位主任医师和一位副主任医生共同评定。·免疫组化染色判断标准参照文献口¨町∞1：每张切片随机观察5个高倍视野，每个视野记数i00个肿瘤细胞。按显色强度分为4级：阴性(不着色)：弱阳性(着淡黄色)、阳性(着棕黄色)、强阳性(着棕褐色或者出现粗大的棕褐色颗粒)，以0-3分来分别代表不同显色强度。同时计算阳性肿瘤细胞百分数，对阳性肿瘤细胞比例评分(阳性细胞百分数0％评分为0，1％-9％评分为0．1，10％一49％评分为O．5，大于50％评分为1．0)，用阳性强度评分乘以

7、阳性肿瘤细胞比例评分得到最后的半定量H值来衡量最终的蛋白表达强度。按照每个指标各自中位H值来确定肿瘤组织中指标表达的高低。6．生存分析：先就各指标对生存期的影响进行单因素分析，之后再行多因素分析，确定非小细胞肺癌手术患者生存期的独立影响因素。7．统计学方法：采jENspssl3．0统计软件进行统计分析，数据中样本率的比较采用x2检验，Kaplan-Meier法进行生存分析、对生存曲线进行log—rank检验，对生存多个影响因素采用Cox比例风险回归模型分析。4硕士学位论文第三章结果3．1临床特征与生存分析第三章结果3．1．1一般临床特征68例病例中4例失访

8、，失访率5．9％。随访后证实2例生存期小于等于3个月，5例在外院行