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时间:2018-05-12
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1、1第八节污染的防止与挽救污染:微生物发酵为纯种发酵,如有他菌侵入称为污染。一、杂菌污染的防止与挽救(一)危害性1、引起异常发酵会影响产物产量①生产菌的生长受抑制测OD值菌浓度下降②C、N消耗加速,ph值的不正常变化③泡沫一般增多粘稠颜色加深,使培养液发酵发臭④发酵周期缩短22、影响产物提炼,使产物质量不得保证如溶媒存在,使培养液乳化,不易分层(1)有机溶剂萃取工艺:染菌的发酵液含有更多的水溶性蛋白质,易发生乳化,使水相和溶剂相难以分开(2)离子交换工艺:杂菌易粘附在离子交换树脂表面或被离子交换树脂吸附,大大降低离子交换树脂的交换量33
2、,对产品质量的影响(1)对内在质量的影响:染菌的发酵液含有较多的蛋白质和其它杂质。对产品的纯度有较大影响。(2)对产品外观的影响:一些染菌的发酵液经处理过滤后得到澄清的发酵液,放置后会出现混浊,影响产品的外观。44,对过滤的影响发酵液的粘度加大;菌体大多自溶;由于发酵不彻底,基质的残留浓度加度。造成过滤时间拉长,影响设备的周转使用,破坏生产平衡;大幅度降低过滤收率。5,染菌对三废处理的影响使过滤后的废菌体无法利用,发酵染菌的废液,生物需氧量(BOD)增高,增加三废治理费用和时间。发酵染菌的危害1,直接经济损失2,间接经济损失5(二)、
3、与危害程度相关的几个方面①与产品的品种有关,酒精和丙酮丁酸较小AA.核酸严重抗生素(窄谱广谱)②染菌与发酵周期有关,发酵周期长,较易染菌,如前中期染菌后果较严重。6③杂菌类型染球菌:后果较严重,其繁殖速度特快,染短杆菌:后果较严重,染菌的时间越早,危害越大,染菌量越多,危害越大。④染菌原因:公共系统引起染菌,影响面大,后果严重,公共系统为空气,总过滤器,空气管道不严密,公共补料系统,公共系统染菌,就会引起连续染菌,大面积染菌。7(三)、发酵过程中染菌的检查判断1,杂菌的检查方法借助适当的方法,才能正确而及时地发现发酵过过程是否污染杂菌
4、和染菌的原因与途径。检查杂菌的方法,要求淮确可靠和快速,这样才能在短时间内获得效果。目前生产上常用的检查方法有:①显微镜检查;②平板划线检查;③肉汤培养检查。8判断发酵是否染菌应以无菌试验结果为根据。无菌试验的目的:(1)监测培养基、发酵罐及附属设备灭菌是否彻底(2)监测发酵过程中是否有杂菌从外界侵入(3)了解整个生产过程中是否存在染菌的隐患和死角92,各种检查方法的比较3种方法各有优缺点,显微镜检查方法简便、快速,能及时发现杂菌,但由于镜捡取样少,视野的观察面也小,因此不易捡出早期杂菌。平板划线法的缺点是需经较长时间培养(一般要过夜
5、)才能判断结果,且操作较繁琐,但它要比显微镜能捡出更少的杂菌。103,杂菌检查中的问题(1),检查结果应以平板划线和肉汤培养结果为主要根据(2),平板划线和肉汤培养应做三个平行样(3),要定期取样(4),酚红肉汤和平板划线培养样品应保存至放罐后12小时,确定为无菌时方可弃去(5),取样时防止外界杂菌混入的措施11124,检查的工序和时间选择那些生产工序和时间的样品检查也是十分重要的问题。科学合理的选择检查工序和时间,对于除去已污染杂菌的物料,避免下道工序再遭染菌,有着直接的指导意义。有时即使由于检查时间较长,未能及时指导本批生产,但对
6、于找出造成染菌事故的环节,分析染菌原因,杜绝染菌漏洞也是不可缺少的。由于生产菌种及产品的不同,检查的时间也不完全一样:但总的原则是一致的,即每个工序或经一定时间都应进行取样检查。检查的一般时间或工序见下表。13发酵过程的杂菌检查14除了以上的方法外,在实际生产中还可以根据pH值、尾气中CO2含量和溶解氧等参数的异常变化来判断是否染菌。15(四)、发酵染菌率和染菌原因的分析发酵染菌能给生成带来严重危害,防止杂菌污染是任何发酵工厂的一项重要工作内容。尤其是无菌程度要求高的液体深层发酵,污染防止工作的重要性更为突出。发酵设备、空气除菌系统和
7、培养基灭菌系统等的有关设备以及管道的配置都必须严格符合无菌要求。如果设备结构和管道配置不合理,制造、安装不注意或在发酵过程中操作不慎就会使发酵液污染杂菌,导致产量下降甚至得不到产品。在发酵前期或中期染菌,杂菌会很快消耗掉营养物质,使生产菌无法正常生长而引起倒罐。在发酵后期染菌,虽然没有早期或中期染菌的影响大,一般会使产率下降并影响产物的提取,但如核苷酸等某些产品的发酵即使在后期染菌,也会使发酵产物被所染杂菌迅速消耗掉而得不到产品。16因此,染菌问题是影响产率和后工序操作的主要因素之一,必须予以重视。认为染菌是不可避免的,这是一种错误看
8、法。“决定的因素是人不是物”。只要我们思想上重视,对各个因素和环节周密考虑、严格掌握,是完全可以避免和减少污染的。本节将根据以往工厂中发生染菌事故的经验教训来分析发酵系统中染菌的原因,来认识整个发酵过程中可能造成污染的各
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