notch3及其cadasil突变体的相关功能比较研究

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1、万方数据论文题目：丛Q!gH3盈甚￡迦△S!L塞变馇的担羞功篮世楚班窒答辩委员会主席：韭丞萱班塞虽答辩委员会成员：堡丞萱堑塞旦黄陵垩塾握昌基班窥旦论文答辩日期：2016年5月31曰万方数据温州医科大学硕士学位论文目录摘j}⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3第一章前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．1CADASIL⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．51．2Notch家族蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．51．3CADASIL与纤维化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61．4CADASIL与炎症反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．71．5CADASIL与癌症⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．71．6本文的研究内容及意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7第二章材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．2主要试剂的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122。3实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13第三章结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯203．1CADASIL突变体R90C和R169C真核表达载体的构建及鉴定．．203．2Notch3及其突变体对多种细胞表型的差异调控及部分机制研究213．3对DNA甲基化转移酶1(DNMTl)的调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3l第四章讨论及分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．334．1CADASIL突变体R90C和R169C真核表达载体的构建⋯⋯⋯．．334．2CADASIL突变体R90C和R169C与野生型Notch3对HAVSMC细胞和m球．90细胞的胞外基质蛋白的差异调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯334．3CADASIL突变体R90C和R169C与野生型No

4、tch3对小胶质细胞BV2的差异调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯334．4CADASIL突变体R90C和R169C与野生型Notch3对不同类型肿瘤细胞表型的差异调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯344．5CADASIL突变体R90C和R169C与野生型Notch3对DNMTl的差异调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯344．6存在问题⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．34参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40综述及

5、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52万方数据温州医科大学硕士学位论文缩略语注：按字母顺序排列万方数据温州医科大学硕士学位论文NOTCH3及其CADASIL突变体的相关功能比较研究摘要背景：伴皮质下梗死及白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉血管病变(CADASIL)是由Notch3基因突变引起的遗传性血管性痴呆疾病。CADASIL的典型病理特点是血管壁中血管平滑肌细胞显著的进行性退化直至消失，并伴有Notch3胞外区及致密颗粒性嗜锇物质(GOM)堆积。遗传连锁分析已证实位于第19号染色体上的Not

6、ch3基因的突变是导致该病的原因，目前认为这是一种功能获得性突变，但是基因突变导致其具体获得何种新的功能及其相关机制目前尚不清楚。本实验就其可能获得的新功能和相关机制在多种细胞系中进行筛选和探讨。方法：本实验在人胸主动脉平滑肌细胞(HAVSMC)、人肺成纤维细胞(IMR．90)、鼠小胶质细胞(BV2)、人宫颈癌细胞(HeLa)、人乳腺癌细胞(MCF．7和HCCl937)Az进行相关研究。首先我们用重组PCR的方法构建Notch3的CADASIL突变体R90C和R169C的真核表达载体，然后用脂质体(Lipofectamine2000)转染的方法将野生型(WT)Notch3及突变体R

7、90C和R169C转染到以上细胞中。用蛋白免疫印迹(Westernblot)方法研究胞外基质蛋白collagen和fibronectin及DNA甲基转移酶l(DNMTl)的表达情况；用RT—PCR的方法检测炎症因子TNF．Q和IL．1B基因的mRNA水平的变化情况，用Griess法检测NO水平的变化情况；分别用划线法和细胞计数法检测肿瘤细胞迁移和增殖情况。所有数据分析采用统计学分析，P