低载荷机械振动对小鼠mc3t3-e1细胞增殖及分化的影响

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2、?≯、≮，：_．。，，?≯I．：慧≯1。：j．．．．：∥i∥河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名问钠目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文低载荷机械振动对小鼠MC3T3．E1细胞的增殖及分化的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5一刖吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1l结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28综述流体切应力对成骨细胞信号转导机制影响的

4、研究进展⋯⋯⋯34致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41中文摘要低载荷机械振动对小鼠MC3T3．E1细胞增殖及分化的影响摘要目的：运用低载荷机械振动细胞模型，评价力学载荷作用对小鼠MC3T3．E1细胞生物活性的影响，探讨低载荷机械振动作用小鼠MC3T3．E1细胞成骨相关信号分子基因蛋白表达的变化。方法：1研究低载荷机械振动模型对小鼠MC3T3．E1细胞增殖的影响采用35Hz，加速度0．259的低载荷机械振动装置，作用于小鼠MC3T3．

5、E1细胞，按每天振动时间，分为A，B，C，D四组，时间分别为0min，15min，30min，60min，连续7天。通过光镜及MTT增殖实验检测不同振动条件下小鼠MC3T3．E1细胞增殖的变化情况2研究低载荷机械振动模型对小鼠MC3T3．E1细胞分化能力的影响。按上述分组，应用低载荷机械振动装置连续干预14天，通过茜素红染色及显微镜观察钙化结节数目及AIP活性测定，研究不同振动条件对小鼠MC3T3．E1细胞分化能力的影响。3研究低载荷机械振动对小鼠MC3T3一E1细胞成骨相关信号分子基因及蛋白表达的影响按上述分组，连续干预

6、7天，采用Real—timePCR检测不同振动条件下成骨相关信号分子基因TGF．B及BMP一2，Runx2的转录变化，WesternBlot检测不同振动条件下成骨相关蛋白TGF．131、pERK及Runx2的表达水平。结果：1A、B、C、D组MTT实验分别为(O．292+0．0254)、(O．553+0．041)、(O．596+0．078)、(O．313士0．037)，与A组对比，B组、C组的成骨细胞增殖变化有统计学差异(尸0．05)；2A、B、C、D组ALP活性测分别为(5．014

7、+0．094)、(7．2594-0．314)、(8．529+0．186)、(5．299+0．136)。B组、C组的钙化结节数目及ALP活性较A组、D组有显著统计学差异(尸0．05)。WesternBlot证实B组、C组成骨细胞的低载荷机械振动刺激TGF．B1、pERK及Runx2蛋

8、白表达水平与A组、D组有统计学差异俨0．05)。结论：1低载荷机械振动(35Hz，加速度0．259)，每天振动1次，每次15min、30min，连续7天，可提高小鼠MC3T3一E1细胞的增殖能力；连续14天，可提高分化能力。2低载荷机械振动(35Hz，加速