tiflγ基因启动子区域突变和甲基化与非小细胞肺癌发生关系的研究

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1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：逛垄缝!日期：上型乒一苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏9、}I大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文

2、献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和屯子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。’涉密论文口本学位论文属在年月解密后适用本规定。非涉密论文叼导师签名：差暨隆墼日期：尘丝啤一期：卫生牡TIFIy基因启动子区域突变和甲基化与非小细胞肺癌发生关系的研究中文摘要背景与目的：TIFly(Transcriptionintermediaryfactorlgamma)属于转录中介因子1家族的成员，可干扰TGF．[3／

3、Smad信号通路，抑制TGF．B介导的信号传导，且TIFI?在多种肿瘤细胞的表达减弱和缺失表明TIFI?在癌症的发生发展过程中起到抑癌的作用。本研究旨在探索TIFI?在non．smallcelllungcancer(NSCLC)与组织中的表达差异以确定TIFI?与肺癌发生关系以及肺癌细胞中TIFI?表达调控的潜在机制。方法：选取13例NSCLC患者癌组织以及对应的癌旁组织样本，培养正常支气管上皮细胞HBE和NSCLC细胞株：A549和95C。运用Real．timePCR和westemblot检测细胞与组织中IYFly基因的表达，并用InlageJ灰度扫描软件计算TIFI?的相

4、对表达量。通过DNA测序的方法检测TIFly基因启动子区域突变情况，并采用Bisulfite．sequencingPCR(BSP)克隆测序方法检测TIFl7基因启动子区域甲基化情况。结果：相对于HBE，TIFI?mRNA和蛋白在A549和95C中显著下调俨<0．05)，对13对组织样本中的TIFI?mRNA的表达量检测结果发现在9对(69．2％)癌旁组织样本里TIFlymRNA的表达量高于癌组织样本(尸<0．05)。启动子活性分析结果表明TIFly基因核心启动子位于启动子一282一一30区段。突变检测包含核心启动子的T1F17基因．287一．5区段发现在各细胞株中该区段没有突

5、变发生。经BSP克隆测序方法分析发现在死W7基因启动子．287一．5区域里存在5个可被甲基化的CpG位点(-214、．128、．124、．65和一55)。但这些CpG位点的甲基化频率在NSCLC细胞株中相比HBE没有显著差异。结论：TIFI?在NSCLC的发生中可能起抑癌的作用，T1Fly基因核心启动子位于启动子．282一．30区段，TIFl7基因启动子区域-287一．5在正常细胞和NSCLC细胞中都没有发生突变，但在一287一．5区域中存在5个可被甲基化的CpG位点。关键词：非小细胞肺癌；TIFl7；甲基化；bisulfite．sequencingPCR(BSP)作者：汪龙

6、强指导老师：张洪涛AbstractAssociationofmutationandmethylationinthepromoterregionofTlFlvwithnon-smallcelllungcancerAssociationofmutationandmethylationinthepromoterregionofTIFlywithnon-smallcelllungcancerBackgroundand0bjeetive：TIFl7(Transcriptionintermediaryfactor1gamma)，whichbelongstotranscriptionint

7、ermediaryfactor1family,isallinhibitoroftheTGF-13／SmadsignalingpathwayandcouldinhibitthesignaltransductionmediatedbyTGF一13．ThedeficiencyofTIFlyexpressioninavarietyoftumorcellssuggeststhatTIF1ymayplayasatumorsuppressorgeneincancerdevelopment．Theaimofthisst