人工养殖菲牛蛭（poecilobdella manillensis lesson，1842）抗凝血活性物质含量动态变化研究

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1、中山大学硕士学位论文人工养殖菲牛蛭（PoecilobdellamanillensisLesson，1842）抗凝血活性物质含量动态变化研究姓名：汪波申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：吕军仪20070528中山大学硕士学位论文人工养殖菲牛蛭(PoecilobdellamanillensisLesson，1842)抗凝血活性物质含量动态变化研究专业：硕士研究生：指导教师：摘要水生生物学汪波吕军仪教授本论文主要研究了在人工养殖条件下，不同时期的菲牛蛭体内抗凝血物质含量的动态变化情况，同时优化了菲牛蛭活体、干体、唾液腺分泌物中的抗凝血活性物质的提取方法和

2、检测方法，1．由于菲牛蛭抗凝血活性物质提取方法的多样性，我们选择了一些具有代表性的方法(蒸馏水直接提取、有机溶剂去除杂质蛋白、盐析等方法)进行提取以体外抗凝血活性为指标，通过定性(凝血酶直接滴定法)和定量(ChromonymTH为生色底物的比色法)的方法检测后，选定了最适合提取抗凝血活性物质的方法。同时优化了提取工艺和检测方法。2．人工养殖条件下，由于菲牛蛭取食机会比较多，所以菲牛蛭的生长动态曲线，类似于连续生长动态曲线。在不同的养殖时期，随着菲牛蛭年龄的增加，每条菲牛蛭体内的抗凝血物质含量逐渐增加，但增长速度比菲牛蛭体重增加速度要低，因此单位质量菲牛蛭体

3、内的抗凝血物质含量反而逐渐减少。由于菲牛蛭体内的抗凝血物质含量在前三个月增长速度比较快，所以考虑到养殖成本，提取抗凝血物质的菲牛蛭应该最好是三月龄以上的菲牛蛭。3．菲牛蛭是一种重要的中药材，在加工菲牛蛭时候，一般采取直接晒干的方法，而本实验研究结果显示，菲牛蛭体内抗凝血活性物质含量在晒干过程中会中山大学硕士学位论文急剧下降，所以如果是利用菲牛蛭提取抗凝血物质时候，应该直接利用菲牛蛭的活体进行快速处理，而不要采取晒干的方法进行处理。4．菲牛蛭体内的抗凝血物质大多分布在头部，当吸取血液后，会有～小部分抗凝血物质随体液流到全身，这导致空腹时候的菲牛蛭和饱食时候的

4、菲牛蛭的尾部抗凝血物质含量不一样。在空腹时候，菲牛蛭尾部抗凝血物质含量比较低；而饱食时候，菲牛蛭尾部抗凝血物质含量显著高于空腹时候(P<0．05)。5．菲牛蛭吸取血液后，会有一部分抗凝血物质随吸取的血液流到全身，利用一种特殊的诱吐剂处理后，使菲牛蛭将体内部分抗凝血物质分泌出来，再进行高效提取，结果提取的抗凝血活性物质含量也比较高，这样就得到一种既能够取出这一部分抗凝血物质，又能够不处死菲牛蛭的方法，可以对菲牛蛭进行重复利用，可以大大缓解菲牛蛭的供求矛盾，保护菲牛蛭这种中药材。关键词：人工养殖菲牛蛭抗凝血物质动态变化ll中山大学硕士学位论文Thestudyo

5、fthecontentanddynamicalterationoftheanticoagulationsubstanceintheartificialPoecilobdellamanillensisLesson，1842Major：．HydrobiologyName：Wang130Supervisor：ProfessorLvJunyiAbstractPoecilobdelamanillens缸Lesson,1842hasbeentheChinesetraditionalmedicineformanycenturies．Inthisthesis,thecon

6、tentandthedynamicalterationoftheanticoagulationsubstanceintheartificialPoecilobdellamanillensisLesson,1842werestudied．Atthesanletime,theextractingmethodsandthedetectingmethodsofthea越ic纠蝴i0静固}b醴al辨we陴ortimizedabsolutelyinthisstudy．SinceSOmanyoftheextract吨methodsoftheanticoagulation

7、substance,fewofrepresentativemethodswereselectedinthisexperiment，suchasnormaldistilledwaterextracting,wipingofftmp砸typroteinwithorganicsolventandsaltingout．Finally,thethrombintitrationmethodandtheehromogenicsubstratemethodhadbeenusedtotestanddisplaytheanticoagulationeffectthrought

8、hecomparisonwithstandardactiveoft