上海地区小鼠诺瓦克病毒的感染状况及病毒的分离和表达

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1、援旦大擎万方数据硕士学位论文上海地区小鼠诺瓦克病毒的感染状况及病毒的分离和表达InfectionofMurineNorovirusandExpressionofIsolatedVirusesinShanghaiArea院系：上海市计划生育科学研究所专业：动物学姓名：刘芹导师：高诚研究员万方数据目录英文缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2ABSTlj【ACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4前言⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一6第一部分两种方法对上海地区小鼠诺瓦克病毒的检测分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8一、材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8二、方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8三、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16第二部分细胞培养及病毒分离⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18一、材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯18二、方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18三、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23第三部分ORF2的克隆及原核表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27一、材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27二、方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27三、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40本文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47攻读硕士学位期间发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．63致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯64万方数据复旦大学硕士学位论文上海地区小鼠诺瓦克病毒的感染状况及病毒的分离和表达英文缩略词表1万方数据复旦大学硕士学位论文

5、上海地区小鼠诺瓦克病毒的感染状况及病毒的分离和表达上海地区小鼠诺瓦克病毒的感染状况及病毒的分离和表达中文摘要小鼠诺瓦克病毒(MurineNoroviruses，MNV)属于杯状病毒科，诺如病毒属，在实验小鼠中的自然感染率很高，最初是在免疫缺陷小鼠内发现的。感染MNV后，免疫功能正常的小鼠通常无明显症状，而免疫缺陷小鼠可以出现致死性感染。MNV具有遗传和抗原多样性，容易发生变异，我国关于MNV的报道还比较少，对其致病力及对实验研究的影响尚不完全清楚，也没有明确的感染情况调查。为了解上海地区实验小鼠自然感染MNV的状况，本实验抽取委托检测单位送检的

6、319只SPF级实验小鼠，分别采集盲肠内容物和血清样本，应用逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增小鼠盲肠内容物样本中MNV的特异性基因片段来检测MNV的感染状况，同时采用酶联免疫吸附试验(Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)与核酸检测方法进行对比。MNV可以在小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞内进行复制，并能产生细胞病变效应(Cytopathiceffect，CPE)，利用这个特性，可以将RT-PCR检测结果为阳性的盲肠内容物样本稀释后经0．22I_tm滤膜过滤，将滤液接种到RAW264．7细胞分离

7、病毒，盲传后采用RT-PCR方法鉴定。MNV是RNA病毒，基因组含有四个开放阅读框(Openreadingframes，ORFs)，其中的ORF2编码衣壳蛋白VPl，而目前关于MNV的研究多与VPl有关，根据GenBank中登陆的国内广州株序列设计相关引物，扩增分离毒株的ORF2，并进行克隆、原核表达，观察是否有诱导蛋白产生。经RT-PCR检测的319份小鼠盲肠内容物样本中，阳性样本95份，阳性率为29．78％。对180份经RT-PCR检测的小鼠的血清样本进行ELISA检测，阳性样本70份，阳性率为38．89％。RAW264．7细胞盲传5代后在

8、24h内出现CPE，72h内病变逐渐明显，细胞培养物经RT-PCR鉴定，凝胶电泳得到一条187bp的目的条带，测序结果与样本来源一致。经RT-PCR扩