mirna-424-5p在胰腺癌中的作用及机制研究

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1、万方数据中图分类号B鱼量UDC6lO博士学位论文学校代码!Q5塑密级公珏miRNA-424．5p在胰腺癌中的作用及机制研究MechanismandroleofmiRNA··424-·5pinpancreaticcancer作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：吴科敏临床医学外科学(普通外科)湘雅医院孙维佳敝答辩日期础D乙答辩委员会主席盔凼中南大学二O一四年五月万方数据学位论文原创性声明删本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过

2、的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：辜撇日期：巡年上月丛日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：罢．姓

3、缸聊签名』掣幻皂日期：巡年±月碰日万方数据博士学位论文中文摘要miRNA．424．5p在胰腺癌中的作用及机制研究摘、要研究背景：胰腺癌是消化系统比较常见的恶性肿瘤之一，已经成为美国癌症相关死亡原因的第四位。大多数患者在胰腺癌诊断后的12个月后死亡，诊断后能够存活5年者极少。胰腺癌预后差，归因于临床症状出现较晚，早期局部侵犯和高度转移潜能，大多数患者一经诊断即失去手术机会，而胰腺癌患者能够获得较长生存率的唯一的机会便是能够进行根治性手术切除。胰腺癌被认为是一个复杂的与多种基因有关的疾病。迄今为止，多条信号通路与众多的生长因子、癌基因和抑癌基因等的异常表达或激活参与了

4、胰腺癌的发生及发展过程。因此探索胰腺癌的发病机制、寻找新的诊断生物标记物和治疗靶点是提高治疗效果的关键。MicroRNA(miRNA)是近些年来被发现的一类非编码单链小RNA分子，其参与了众多的生物学过程，例如生长、增殖、分化和凋亡等过程。miRNA通过与它们的靶向mRNA的3’UTR区以碱基互补配对的方式结合，导致mRNA降解或抑制其翻译，通过这种机制miRNA降低了靶基因蛋白的表达水平。miRNA的这种负性调节与多种人类肿瘤密切相关，比如胰腺癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌等。因此深入研究miRNA在人体肿瘤中的表达及其功能，对探索肿瘤的发病机制具有重要

5、意义，并将有利于对肿瘤的万方数据博士学位论文中文摘要诊断、治疗及预后的判断。ERKl／2信号通路已成为肿瘤发生发展相关因素的研究热点。研究表明ERKl／2可参与多种生物学反应包括细胞增殖与分化、细胞骨架的构建、细胞形态维持、细胞凋亡等。然而ERKl／2在胰腺癌中的作用却知之甚少。目的：检测miR-424-5p在胰腺癌中的表达的情况，探讨miR-424．5p在胰腺癌的发生发展及侵袭转移中的相关功能机制，分析miR-424．5p的靶基因SOCS6与胰腺癌临床病理因素的关系，同时研究miR-424—5p对ERKl／2信号通路的影响。方法：1．收集2009年9月_2012

6、年9月在中南大学湘雅医院手术切除的胰腺癌组织新鲜标本及其癌旁组织各30例，正常胰腺组织标本10例作为对照组。采用实时荧光定量real．timePCR方法检测miR-424．5p在胰腺癌、癌旁及正常胰腺组织中的表达情况。同时用real．timePCR和westernblot方法检测SOCS6的表达情况。分析miR-424．5p与SOCS6的表达之间的关系及SOCS6与胰腺癌患者临床病理关系。2．选取四个胰腺癌细胞系PANC．1、PC．2、SWl990、CFPAC．1用real．timePCR方法检测miR一424—5p的表达差异。选取miR-424—5p高表达的细胞

7、系进行后续试验。将hsa-miR-424—5pinhibitor使用脂质体Lipofectamine2000转染)kPANC-1细胞，同时设置阴性对照组和空白对照组。Real-timePCR检测转染后miR-424．5p的表达情II万方数据博士学位论文中文摘要况。同时用real．timePCR和westemblot方法检测下游靶点SOCS6的表达水平。MTT法检测细胞的增殖并绘制生长曲线：流式细胞术检测细胞的凋亡和细胞周期：Transwell法检测细胞迁移和侵袭的能力。3．运用生物信息学(miRbase，TargetScan，miRanda)的方法，预测SOCS6

8、为其可能的