猪瘟病毒慢性感染对细胞因子转录的影响

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1、中国兽医药品监察所硕士学位论文猪瘟病毒慢性感染对细胞因子转录的影响姓名：张正兴申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：王琴2012-06中文摘要猪瘟(ClassicalSwmeFeVer，CSF)是由猪瘟病毒(ClassicalSwineFeverⅥnls，CSFV)引起的猪的高度接触性、传染性疾病，给养猪业造成巨大威胁和经济损失，被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的法定传染病之一。CSFV中等致病力毒株造成慢性感染，疫苗株能对机体产生免疫保护作用。通过研究CSFV中等致病力毒株和疫苗株体外感染猪外周血

2、单核细胞(PBMC)及人工感染实验用猪后，对细胞因子转录和表达的影响，系统分析CSFV中等致病力毒株感染及疫苗免疫对机体免疫系统的影响，为阐释CSF慢性感染的机制提供理论依据。分别使用CSFV中等致病力毒株HeBHHl／95及HCLⅣ体外感染PBMC，在24hpi、48hpi，运用qImPCR技术对白介素、趋化因子、毒性反应相关分子、IL．1p转换酶、粘附分子、抗病毒作用相关分子、干扰素及干扰素调控因子、细胞因子受体共59种免疫相关分子进行全面测定。结果显示：在24hpi，HeBHHl／95感染引起9种细胞因子转

3、录水平上调，50种下调，MCP．1、IL．10【、IL一1p、IL一8、IL一6转录水平显著上调(RQ>2．1)。IL．1值转录水平上调最显著(RQ一3．16)，IFN．Q转录水平下调最显著(I的=O．54)；HCLV感染引起9种细胞因子转录水平上调，50种下调，MCP一1、IL．1C【、IL．1p、IL．8、IL一10、TGF．B2转录水平上调(RQ>2)。MCP一1转录水平上调最显著(RQ=3．02)，IFN一0【转录水平下调最显著(RQ=O．447)。在48hpi，HeBHHl／95感染引起12种细胞因子转

4、录水平上调，TLR4和IFN．u不变，45种下调，IL．1c【、MCP一1、IL．8转录水平上调最显著(RQ>2)，IL一1a转录水平上调最显著(RQ=2．75)，IL．12p35转录水平下调最显著(RQ=0．427)；HCLV感染引起12种细胞因子转录水平上调，47种下调，MCP．1、IL一1u、IL一1B、IL一8转录水平显著上调(RQ>2_3)。IL．1Ⅱ转录水平上调最显著(RQ一2．63)，TGF．R转录水平下调最显著(RQ=0．295)。HeBHHl／95与HCLV体外感染均能导致PBMC体外培养系免疫

5、相关因子转录水平变化，IL．10【、IL—lp、IL一8等炎性相关因子转录水平均显著升高，毒性反应相关分子、IL—lp转换酶、粘附分子类细胞因子均显著下降，但在抗病毒因子转录改变机制上具有差异，如HCL，v诱导Rantes上升，HeBHH／95则下调。综上所述，提示CSFV中等致病力毒株HeBHHl／95和HCLV体外感染24hpi和48hpi均可诱导机体炎症反应，但在诱导机体细胞抗病毒感染应答机制上具有差异。将23头实验用猪(60日龄)随机分为攻毒组、疫苗组和对照组，定期采血(Odpi、1dpi、2dpi、5d

6、pi、7dpi、9dpi、12dpi、16dpi、20dpi、23dpi、28dpi、30dpi、35dpi、43dpi)，采用qImPCR技术、流式细胞仪和ELISA技术，检测猪外周血中10种细胞因子转录水平、淋巴细胞亚群分析和猪瘟抗体水平。结果显示：HeBHHl／95感染组实验猪存活43dpi以上，在感染过程中T淋巴细胞减少和免疫抑制是猪瘟慢性感染早期的临床特征，具有直接杀伤能力的Y6T细胞、杀伤性T细胞和辅助型T细胞的数量降低均开始于2dpi，而不具备直接杀伤能力的活化记忆T细胞数量的降低开始于9dpi。在

7、HeBHHl／95感染后，所有检测抗病毒因子(IL．1a、IL．2、IL-4、IL．8、IFN．0【、IFN—B、TNF、Mxl、PKR和OAS)均显著上升。HCL、，免疫组在5—7dpi时淋巴细胞绝对数量略有上升，在12dpi到达高峰，对照组差异显著(P40％)出现在9．12dpi之间，在此期间IL一8转录水平大幅上调，这两者增长与抗体形成

8、的相关性揭示了Th细胞通过增殖诱导B淋巴细胞成熟，诱导细胞因子表达产生特异性CSFV抗体，并形成免疫保护机制。综上所述，通过对CSFV体外PBMC感染和实验动物CSFV慢性感染／免疫后的各免疫相关因子动态变化进行全面研究，通过比较感染前／后和免疫前／后各指标变化，分析了病毒在逃避宿主免疫过程和形成特异性抗体中起关键作用的细胞及细胞因子的动态变化，为探索细胞因子作用奠定的基