八聚体蛛丝蛋白基因毛囊特异性表达载体的构建及其转基因研究

《八聚体蛛丝蛋白基因毛囊特异性表达载体的构建及其转基因研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学校代码堇Ql至§分类号——学号兰!曼Q墨Q!量编号——论文题目八聚体蛛丝蛋白基因毛囊特异性表达载体的构建及其转基因研究THECoNSTRUCTIoNoF8SHAIRFoLLICLESSPECIFICEXPRESSIONVECToRANDITSTRANSGENERESEARCH学院：生盒型堂堂院专业：动物堂研究方向：生殖生物堂及生物技本姓名：蘸娜指导教师：郭旭峦梁浩二零一四年四月原创性声明J

2、illlllrJlnlJlllJlUldHIJIHI舢Y2571624本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除本文已经注明引用的

3、内容外，论文中4i包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得内蘩直太堂及其他教育机构的学能或证书而使阁过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已存论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：强鲤^栏口期：趁!丝：』：逆舯溯躲塑夔貔指导教师签名：黧E圣曼二靴日期：童曼雏：J：巡在学期间研究成果使用承诺书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：内蒙古大学有权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘，允许编入有关数据库进行检索，也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文

4、。为保护学院和导师的知识产权，作者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果，须征得内蒙古大学就读期间导师的阿意；若用于发表论文，版权单位必须署名为内蒙古大学方可投稿或公开发表。学位论文作者签名：盈避指导教师签名：学位论文作者签名：链董墼￡指导教师签名：日期：趁l幺：jl矽日期：多螋必塑内蒙古大学硕士学位论文八聚体蛛丝蛋白基因毛囊特异性表达载体的构建及其转基因研究摘要蜘蛛丝具有质量轻、强度高及韧性大等优越特性，由于其开发利用难度大，因此借助生物工程技术生产蛛丝原材料成为首选方法。八聚体蛛丝蛋白基因是由人工合成的拟蜘蛛

5、拖丝蛋白基因的核心序列S连接成的八聚体(Spidroinl8，8S)，为了进一步探究8S基因的功能及特性，本实验构建了毛囊细胞中特异性表达8S基因的载体，并转染了小鼠表皮细胞和绒山羊胎儿成纤维细胞，验证了启动子的表达能力；通过转染小鼠胚胎干细胞获得阳性克隆，为嵌合体小鼠的制备奠定基础，并运用原核注射方法，制各了8S转基因小鼠，为研究8S对毛发特性的影响提供了研究基础。1．8S基因毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP的构建通过PCR扩增出PolyA片段，连接到载体pMDl9T-8S上构成中间克隆载体pMDl9T-8S。PolyA。分别用KpnI和SalI将其

6、与带有毛囊特异性启动子的载体pCDsR-KAP6—1．IGFI双酶切后，重组成8S基因的毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP，经酶切鉴定与测序分析，结果与预期设计相符。2．8S基因毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP的细胞转染及鉴定在脂质体的介导下，将毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP分别转染入小鼠表皮细胞和绒山羊胎儿成纤维细胞中，经双重筛选获得阳性克隆。对转基因细胞基因组进行PCR特异性扩增检测，结果表明外1内蒙古大学硕士学位论文源目的基因8S已稳定整合到转基因细胞基因组中。提取筛选得到的转基因小鼠表皮细胞及绒山羊胎儿成纤维细胞的总RNA，进行反转

7、录PCR检测，结果表明外源基因8S在这两种转基因细胞中均呈现表达阳性。3．8S转基因小鼠胚胎干细胞的获得及转基因小鼠的制备通过转染小鼠胚胎干细胞，获得了外源基因8S已稳定整合到转基因细胞基因组中的阳性克隆，为下一步制备嵌合体小鼠奠定基础。同时使用载体pCDsR．K8SP对小鼠受精卵进行原核注射，获得67只待检原代小鼠，经PCR鉴定，共检测出6只8S转基因阳性小鼠，阳性得率为8．96％。本实验中8S转基因小鼠的制备及初步鉴定，为进一步研究人工合成蛛丝蛋白的特性以及利用生物工程方法开发蛛丝新型材料提供了研究基础。关键词：八聚体蛛丝蛋白基因；毛囊特异性表达；细胞转

8、染；原核注射；转基因小鼠内鍪直奎堂堡主兰垡堡茎一——————————————————一一THECONSTRUCTIONOF8SHAIRFOLLICLESSPECIFICEXVRESSmNVECTORANDITSTRANSGENERESEARCHABSTRACTSpidersilkhasthesuperiorcharacteristicsof11曲‘welght，meChanicals骶n啦andtoughness．DuetoitsexploRationdimCul妣wimtheaidofbioengineeringtechnologiestogenerate

9、spidersilk,becomcspreferen