基于massarray的人多瘤病毒高通量检测方法的建立与应用

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1、中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文硕士学位论文学校代码：学号：基于MassARRAY的人多瘤病毒高通量检测方法的建立与应用所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：病原生物学研究所李壳彭俊平彭俊平杨剑杨帆病原生物学病原体检测技术2014年5月中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文目录目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3Abstract⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯．⋯d}前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．s材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．样本⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．83．耗材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯94．试剂与试剂盒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．105．试剂配置⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．106．方法⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．231．基于MassARRAY的人多瘤病毒检测方法的特异性与敏感度验证⋯⋯232．十二种人多瘤病毒与婴幼儿腹泻的相关性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25{寸论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．491．新型人多瘤病毒发现史概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯492，新人多瘤病毒与相关疾病研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一60硕士期间发表文章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。67致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一68独仓Ⅱ性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯70中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文2中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文摘要人多瘤病毒(humanpolyomavimses。HPyVs)是一种在人体里广泛存在的病毒。早期的人多瘤病毒家族只有BK多瘤病毒(BKpolyomavirus，BKP

5、yV)和JC多瘤病毒(JCpolyomavirus，JCPyV)两个成员，因其可在免疫功能不全的个体分别造成多瘤病毒肾炎和进行性多灶性白质脑病而被人们所关注。过去七年里，lO种新型人多瘤病毒陆续被发现，其中除可引发默克细胞癌的默克细胞多瘤病毒(Merkelcellpolyomavirus，MCPyV)及可引发Trichodysplasiaspinulosa的TS多瘤病毒(Trichodysplasiaspinulosa—associatedpolyomavirus，TSPyV)外，其余病毒的病原学角色均尚不明确。人多瘤病毒频繁在人粪便和胃肠道组织中被检出，睁别是人多瘤

6、病毒中最新的三个成员MW多瘤病毒(Malawipolyomavirus，涮VPyV)，STL多瘤病毒(SaintLouiSpolyomavirus，STLPyV)和人多瘤病毒12型(Humanpolyomavirus12，HPyVl2)最初均被发现于粪便或消化系统器官组织中，这使得人多瘤病毒与人体胃肠道疾病，尤其是腹泻的关系引起人们关注。本研究应用美国西格诺公司的基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MALDI—TOFMS)检测平台(MassARRAY)，建立了一种基于多重PCR的高噎量检测方法，可同时检测全部12种己知的人多瘤病毒。本实验运用该方法进，厅病例一对照研究

7、，筛查了包含211份婴幼儿腹泻病人样本和208份正常婴幼儿洋本在内的总计419份粪便样本。本研究在样本中筛查到五种人多瘤病毒：Ⅺ多瘤病毒(K／polyomavirus，KdPyV)，WU多瘤病毒(WUPolyomavirus，WtWyV)，、．4CPyV，MWPyV和STLPyV。结果显示人多瘤病毒在病例组和对照组中的检出荤差异没有显著性；两组中MWPyV的病毒载量差异没有显著性(p>0．05)；研充结果不支持人多瘤病毒作为腹泻相关病原体的猜测。此外，本研究获得了16暴人多瘤病毒的全基因组序列，其中rdPyV，MCPyV，MWPyV和STLPyV的全