多种细胞饲养层的制备与其资源建立

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1、FEEDERPREPARATIONOFSEVERALCELLSObjectiVe：ABSTRACTSepretaeSertolicell，BMSC，MEF，PancreaticfibroblastandestablishceUlines，constmcteddifferentfeederlayersforasourceasacoculturesystemforstemceUs．Methods：1．SeparateSertoliceUwithcollagenaseand晡s—HCl，0ptimizetheconditionofBMSCwiths

2、everalnut“entsolution，SeparateMEForPFbythewayoftissuedigestion．2．MeasureMEFsandPFsViabilityandproliferationformswithMTT，PreserveceUswithDMSOinliquidnitrogen，1’reatMEFsandPFswithM：ItomycinC(10批∥m1)tomakefeederlayers．Results：Pro(IurepureSert01icellbyhypotonictreatment，BMSC(Iu

3、lturedwithDMEM(L)nutrientsolutioninclude15％FBSgrowsbetter，SeparatePFfromconnectiv邑tissueofpancreas，PFandMEFhavethesameViabilityandproliferationforms，CellsPreseⅣedwithDMS0inliquidnitrogen，havethecapabilityofserialsubcultivationafcerreviVal，madeMEFfeederlayerandPFfeede“ayer．C

4、onclusion：1．HypotonictreatmentcallPuri矽Sertolicell．2．DMEM(L)nutrientsolutioninclude15％FBSptomoteBMSCculture．42008届硕上生毕业论文多种细胞饲养层的制备及其资源建立3．SeparatePFftomconnectiVetissueofpancreas，PFandMEFhaVethesameViabilityandproliferationforms．4．EstablishacellrepositoryofMEFandanotherofP

5、F．5．PrepareMEFandPFfeederlayers．KEYWORDS：Sertolicell，BMSC，MEF，Pancreaticfibroblast，Celllines5多种维臆饲葬层麴锈备及其资源建巍实验研究前言饲养层是经有丝分裂阻断剂处理后的细胞单层，细胞失去增殖能力，值仍然产生多种生物活性物质影响其它细胞的增殖和分化。饲养层细胞11l是共培养中用来维持多能f细胞未分戗：特性的细胞，通常由鼠胚胎成纤维细胞(mouseembryofibfoblastMEF)构成，多用于胚胎干细胞(Embryonicstemcell，ESC)

6、的体外培养和建系。饲养层细胞可分泌细胞因子、细胞外基质及多种黏附分子。据报道从MEF的条件培养基中可以分离到的蛋白多达136种囝，其中的自血病抑制因子(UD可使ESC在未分化状态下长期培养，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和干细胞生长因子(SCF)对ESC的生长起促进作用。用MEF建立的饲养层培养体系存在异源性污染等诸多问题，研究者不断探索更实用的饲养层细胞，如：骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcellsBMSC_)嘲、睾丸支持细胞(se哟licellSC)l引、成体输卵管上皮细胞(ad毽l￡fallopiantllbeep

7、ithelialcell)【5】、成体包皮细胞洳豫s心ncell)№】、子宫内膜基质细胞【7】、人胰岛成纤维细胞系MNNK-1【8】等。睾丸Sertoli细胞对生精细胞起支持和营养作用。近年的研究发现，SC除了能分泌免疫保护因子外，还麓分泌转化生长因子a(，弼F．a)、TGF．8、胰岛素样生长因子．I、表皮生长因子吨但GRa)、EGF．^B、FGF等19，10】；共同移植Sertoli细胞可以延长同种移植物的存活时间【111。SC饲养层【4】对体外培养的神经元具有显著的促生长作用。用睾丸支持细胞制备成饲养层，利用其免疫豁免机理及分泌的多种细胞

8、因子可以为干细胞提供良好的生长环境【12】。睾丸支持细胞的体外培养尚无最佳的方法，还处于探索阶段。本实验以胶原酶消化法和低渗处理，获得富集度较高的支持细胞。BMSC