以壳聚糖为载体新型免疫亲和吸附剂及分子印迹聚合物的制备与应用研究

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3、于纤维素的第二大天然多糖。具有无毒、易降解、与生物大分子表现出良好的相容性等优点，因而在医药、食品、环境与农业等领域得到了广泛应用。此外，由于其多糖链上含有大量的游离羟基、氨基等可改性接枝基团，壳聚糖在新型色谱填料的开发制备中也有着重要的应用。在农、兽药残留检测过程中，由于残留物水平较低、属于痕量分析范畴，同时样品基质复杂，在残留检测之前通常需要进行样品净化处理。与传统的样品净化处理技术相比，免疫亲和层析与分子印迹聚合物固相萃取有着选择性高、操作快速简便等优点，表现出良好的应用前景。本研究以禁用蛋白同化类激素一去氢甲睾酮(

4、metandienone，MA)为研究对象，分别制备获得了以壳聚糖为载体的免疫亲和柱及分子印迹亲和柱，并对其性能及应用进行了评价。主要结果如下：(1)以壳聚糖为载体制备戊二醛交联壳聚糖，并与MA抗体偶联制成免疫亲和吸附剂，制备成免疫亲和柱。用红外光谱、电镜对其进行结构表征，证明壳聚糖已交联且抗体成功偶联。单抗偶联的最适pH为8．O、时间为5h、温度为37。C、环氧氯丙烷终浓度为20％；该亲和柱的最佳洗脱液为4mL的90％甲醇溶液，柱容量约为6500ngMA／g湿亲和吸附剂；柱子的平均回收率为96．9％±1．12％；该柱重复

5、使用次数为8次，回收率高于80％，柱容量保持在85％左右；亲和柱的特异性良好；在空白猪肉样品中加标1．5nedg、6．0ng／g，回收率分别为83．18％．90．05％、80．84％．89．14％，CV分别为4．06％、4．88％；在空白饲料样品中同样加标1．5ng／g、6．0叫g，回收率分别为80．84％．90．05％、78．44％-91．09％，CV分别为4．47％、6．46％。(2)以MA为模板分子，以壳聚糖为功能单体制备了MA分子印迹聚合物，并将其填充到柱子中制成分子印迹亲和柱。壳聚糖与MA的最佳比例为6：1，最适

6、偶联pH为9．0，蔗糖的浓度为2％，环氧氯丙烷终浓度为1．0％，反应溶液中甲醇：乙酸水溶液=1：2；用红外光谱、电镜对其进行结构表征，证明壳聚糖分子印迹聚合物已成功制备。MA印迹亲和柱的最佳上样溶液为10％甲醇溶液，洗涤溶液为蒸馏水，洗脱液为4mL纯甲醇。由动力学试验、Langmuir等温吸附线、Scatchard分析得亲和柱在2h后达到平衡，最大吸附量可达到11．5mg／g湿吸附剂，且MA与聚合物之间存在两类不同的结合位点；柱子的平均回T以壳聚糖为载体免疫亲和吸附剂及分子印迹聚合物的制备及其应用研究收率为95．94％±2

7、．90％；该柱重复使用次数为18次；MA分子印迹亲和柱对TP、TB的特异性约等于非印迹亲和柱的10倍，特异性良好；在空白猪肉、饲料、猪肝、鸡蛋样品中加标1．5ng／g、6．0ng／g，回收率为94．26％一106．86％，CV小于4．68％。关键词：免疫亲和吸附剂，分子印迹聚合物，壳聚糖，去氢甲睾酮，高效液相色谱II江苏大学硕士学位论文ABSTRACTChitosanisproducedbythedeacetylationofchitin，whichisknowntobethemostabundantnaturalamin

8、o-polysaccharideaftercellulose．Withthecharacteristicsofnon—poisonous，biodegradabilityandbiocompatibilitywithbiologicalmacromolecules，chitosanhasbeenwide