可溶性环氧化物水解酶抑制剂经微小rna-1调节pi3k通路机制的研究

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1、万方数据分类号＆：3三UDC61O硕士学位论文学校代码!Q533密级公珏可溶性环氧化物水解酶抑制剂经微小RNA．1调节P13K通路机制的研究ThemechanismsofsolubleepoxidehydrolaseinhibitorsregulatingP13KpathwayviamiRNA·-1作者姓名：刘琼学科专业：临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：程洁教授副指导教师：许丹焰教授论文答辩日期2竺!竺：兰：!!答辩委员会主席中南大学二0一四年五月万方数据学位论文原创性声

2、明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：童：!呈塞日期：型丝年上月土日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留

3、并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。导师签名型止日期：盟年互月』日万方数据硕士学位论文中文摘要摘要目的：可溶性环氧化物水解酶抑制剂经微小RNA．1调节P13K通路机制的研究1．研究可溶性环氧化物水解酶抑制剂(solubleepoxidehydrolaseinhibitorsEHi)t-AUCB(trans一4一(4一

4、(3一adamantan一1一yl—ureido)一cyclohexyloxy)．bensoicacid)干预对原代乳小鼠心肌细胞心肌缺血模型中内向整流型钾电流(IK。)幅度的影响。2．探讨t-AUCB调控微小RNA一1(microRNA．1miR一1)机制，明确miR-1参与P13K通路的调控。方法：体外部分：选取出生1天的昆明小鼠乳鼠，培养原代心肌细胞，分5组进行不同的干预：(1)空白对照组(Ctl)；(2)micrONTMmmu—miR—la一3pagomir(agomiR—1)转染组(ago

5、miR—1)；(3)agomiR一1转染+t—AUCB干预组(agomiR一1+t-AUCB)；(4)micrONTMmmu—miR-la一3pagomirnegativecontrol组(NegCtl)；(5)agomiR—l转染+DMSO干预组(agomiR-l+DMSO)。最后以全细胞模式记录钾电流(IKl)。体内部分：1．8周雄性昆明小鼠分成5组：(1)饮用水+假手术组(饮用水+sham)；(2)饮用水+心肌梗死组(饮用水+MI)；(3)t-AUCB0．2mg／L万方数据硕士学位论文中文摘要

6、+心肌梗死组(t—AUCB0．2mg／L+MI)；(4)t-AUCB1mg／L+心肌梗死组(t-AUCB1mg／L+MI)：(5)t-AUCB5mg／L+心肌梗死组(t．AUCB5mg／L+MI)。24小时后取出心梗后缺血区心肌，运用WesternBlot检测缺血区心肌P．AKT、P。GSK3p的表达。2．8周雄性昆明小鼠，用含t-AUCB5mg／L饮用水喂养7天，建立心梗模型后以尾静脉注射转染agomiR．1或阴性对照物agomiR。1NegCtl，具体分组如下：(1)饮用水+假手术组(饮用水+s

7、ham)；(2)饮用水+心肌梗死组(饮用水+MI)；(3)饮用水+心肌梗死组+agomiR_1组(饮用水+MI+agomiR-1)；(4)饮用水+心肌梗死+agomiR-1NegCtl组(饮用水+MI+NegCtl)；(5)t-AUCB5mg／L+心肌梗死组(t。AUCB5mg／L+MI)；(6)t-AUCB5mg／L+心肌梗死+agomiR-1组(t—AUCB5mg／L+MI+agomiR．1)。24小时后取出心梗后缺血区心肌，运用WesternBlot检测缺血区一巴,PAp—AKT、P—GSK3

8、13蛋白的表达。3．8周雄性昆明小鼠，用含t-AUCB5rag／t,饮用水喂养7天，建立心梗模型后以尾静脉注射或腹腔注射P13K抑制剂wortmannin，具体分组如下：(1)饮用水+假手术组(饮用水+sham)；(2)饮用水+心肌梗死组(饮用水+MI)；(3)t-AUCB5mg／L+心肌梗死组(t-AUCB5mg／L+MI)；(4)t-AUCB5mg／L+心肌梗死+wortmannin0．3mg&g(尾静脉注射)(t—AUCB5mg／L+MI+0．3W(尾))；(5