不同处理方式对中华绒螯蟹血淋巴vg的影响

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1、河北大学硕士学位论文不同处理方式对中华绒螯蟹血淋巴Vg的影响姓名：张翔申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：康现江20070601摘要卵黄蛋白是甲壳动物胚胎和幼体生长发育所需的能量和营养源，因此它的合成、积累、多寡等对于胚胎和幼体来说是至关重要的。本文分离纯化了中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)的卵黄蛋白，建立了间接竞争酶联免疫吸附反应(ELISA)测定中华绒螯蟹卵黄蛋白的方法，并研究了切除眼柄及注射不同物质对中华绒螯蟹血淋巴中卵黄蛋白原的影响，为深入阐明中华绒螯蟹卵黄发生及其调控机理提供基础材料。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳，采用不同的染色方法，从成熟中华绒螯蟹卵巢中鉴定出卵

2、黄蛋白，利用常规层析法(DEAE．Cellulose．52)对其进行了纯化。采用常规免疫方法，以纯化的卵黄蛋白作为抗原免疫家兔，制备了抗中华绒螯蟹卵黄蛋白的特异性多克隆抗血清。利用此抗血清，并结合免疫学方法对中华绒螯蟹雌性蛋白进行研究，研究发现：中华绒螯蟹的卵黄蛋白为雌性特异蛋白；卵黄蛋白与卵黄蛋白原有相似的免疫原性；中华绒螯蟹卵黄蛋白与日本沼虾的卵黄蛋白间没有免疫交叉反应。利用卵黄蛋白抗血清，建立了间接竞争酶联免疫吸附反应(ELISA)测定中华绒螯蟹卵黄蛋白的方法，并确立了测定参数：抗血清与包被抗原的最佳工作浓度分别为1：10000和62．5ng／mL；最适检测范围为31．25--500n

3、g／mL，批内变异系数为3．38％，批间变异系数为3．62％。采用ELISA法，对切除单、双侧眼柄及向已切除双侧眼柄河蟹体内注射不同物质对河蟹血淋巴中卵黄蛋白原浓度的变化进行了跟踪测定。结果表明，向已切除双侧眼柄的河蟹体内注射2只眼柄等量物，河蟹血淋巴中卵黄蛋白原的浓度在6h内降至最低点；向已切除双侧眼柄的河蟹体内注射已纯化的性腺抑制激素(GIH)，河蟹血淋巴中卵黄蛋白原的浓度在9h内升至最高点；而且我们的研究发现，切除双侧眼柄能够明显提高河蟹血淋巴中卵黄蛋白原的浓度。关键词眼柄性腺抑制激素血淋巴中华绒螯蟹卵黄蛋白原AbstractYolkproteinsarethenutritiousso

4、ureeembryosandnauplii．Therefom，thesynthesis，inthedevelopmentalstageofcrustaceanstheaccumulationandthequantityofthemisverycrucialtotheembryosandnauplii．VitellinwaspurifiedfromovariesofmaturefemaleChillese加jtten．1姗dedcrab(Eriocheirsinensis)inthisresearch．Andallindirectcompetitiveerlzyme．1inkedimmunos

5、orbentassay(ELISA)fordetectingvitellincontentofE．sinensiswasestablished．ThispaperalsofocusedontheeffectstothefluctuationofhaemolymphvitellogeninlevelsinEsinensisduringovariandevelopmentinducedbyeyestalk。ablationandinjecfionofdifferentextracts．Thisstudyprovidedbasicdatainelucidatingthevitellogenesis

6、andregulationmechanism．WiththePAGE，stillapplyingvariousstainingmethods，ourstudyprovedoneformofvitellinint11em批ovaryofEsinensis．Accordingtothispaper,thevitellinwaspurifiedusingDEAE-Cellulose-52column．By印plyingtraditionalimmunitywayandtakingthepurifiedvitellinasantigentoinjectrabbit．thevitellin，sspec

7、ificantiserumwasobtained．Withthisspecificantiserumandapplyingimmunologymethod，thevitellinofEriocheirsinensiswasstudied·Theresultsshowed：thevitellinofE．sinensisWasthefemale—specificprotein；bothvitellinandvit