glimir-124aurka调控模型的构建及其在神经胶质瘤中的作用

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1、分类号：密级：UDC：学号：406504711023南昌大学研究生学位论文“GLI/miR-124/AURKA”调控模型的构建及其在神经胶质瘤中的作用Therolesof"GLI/miR-124/AURKA"signalingaxisinglioma刘婳培养单位（院、系）：南昌大学基础医学院指导教师姓名、职称：罗时文教授申请学位的学科门类：理学学科专业名称：生物化学与分子生物学论文答辩日期：答辩委员会主席：评阅人：2014年5月19日万方数据学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本

2、人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文

3、的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日I万方数据摘要摘要研究背景：Hedgehog信号通路在调控细胞生长、分化和肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。在

4、生殖细胞中Hh信号转导通路的异常激活往往造成发育过程紊乱；在体细胞中Hh信号转导通路的异常活化则往往伴随多种癌症的发生。肿瘤是在遗传因素和环境因素的共同作用下，细胞周期紊乱和细胞生长失控所致的一类疾病。大量研究表明：肿瘤发生的关键在于肿瘤相关基因的转录失控。某些蛋白作为反式作用因子（transactingfactors）与其他基因的顺式作用元件（cisactingelements）相互作用，实现对肿瘤相关基因转录水平的调控。因此，深入研究肿瘤相关基因的反式作用因子有助于我们了解肿瘤相关基因的表达调控机制。

5、转录因子GLI（Glioma-associatedoncogenetranscriptionfactors,GLI）位于Hh信号通路级联传导的末端，是通路上的关键调控因子，在信号传导中起枢纽作用。研究表明GLI功能异常可能参与多种肿瘤发生发展，但调控机制有待明晰。有研究报道抑制GLI能降低神经胶质瘤细胞增殖与侵袭能力，基因芯片结果也证实GLI抑制的癌细胞中microRNAs的表达发生类似改变，提示受其调控的microRNAs在神经胶质瘤形成及发展过程中可能发挥重要作用。研究目的：1.本课题以GLI为研究靶

6、标，根据生物信息学方法预测具有GLI结合元件的microRNAs，结合基因芯片数据，采用实时定量PCR及WesternBlot等手段，证明miR-124为受GLI调控的microRNA，并确定AURKA为其下游靶基因，从而建立“GLI/miR-124/AURKA”信号轴。2.研究与神经胶质瘤密切相关的microRNAs，特别是miR-124的功能，从分子、细胞和临床水平三个层面分别验证“GLI/miR-124/AURKA”信号轴的正确性，揭示“GLI/miR-124/AURKA”信号轴与神经胶质瘤的关系，

7、丰富Hh-GLI信号网络的调控机制，为寻找神经胶质瘤诊疗新靶点提供理论依据。研究内容：1.前期研究中，我们发现在GANT61处理的神经胶质瘤细胞中许多重要信号通路相关基因的表达发生显著改变，利用生物信息学方法对在GLI抑制条件下的差异表达基因进行GLI结合位点预测分析，发现存在一定数量的差异表达II万方数据摘要基因不含有已知的GLI蛋白转录结合区域，因此我们提出“转录因子/microRNAs/间接靶基因”的调控模型。2.利用特异性小分子抑制剂下调GLI的表达后，通过基因芯片技术分析microRNAs表达谱

8、变化；同时用生物信息学方法对差异表达的microRNAs进行归类分析；采用实时定量PCR技术对富集于某些信号通路的差异microRNAs进行验证。通过分析microRNAs表达谱芯片发现，经GANT61处理后的神经胶质瘤细胞系中，miR-519a、miR-335和miR-124等microRNAs表达水平升高，经过多重验证后，我们优先选取miR-124进行后续的功能研究。3.采用多个数据库（TargetScan算法、基于序列互