氧化苦参碱对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其可能机制

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1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：2009087宁夏医科大学硕士研究生学位论文氧化苦参碱对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其可能机制TheEffectsandUnderlyingMechanismsofOxymatrineonHumanUmbilicalVeinSmoothMuscleCellCalcification学位申请人：＿＿王秀梅＿＿＿＿＿＿＿指导教师：＿＿曹军＿教授＿＿＿＿申请学位门类级别：＿＿医学＿＿＿＿＿＿＿专业名称：＿＿病理学与病理生理学＿研究方向：＿＿心血管病理生理学＿＿所在学院：＿＿基础医学院＿＿＿＿＿论文完成日期：＿＿二○一二年四月＿＿

2、＿宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeTheEffectsandUnderlyingMechanismsofOxymatrineonHumanUmbilicalVeinSmoothMuscleCellCalcificationStudent’sName:WangXiumeiSupervisor：CaoJunProfessorSubjectCategory：MedicalScienceMajor:PathologyandPathophysiologySpecialty:C

3、ardiovascularPathophysiologyCollege:BaseMedicalCollegeCompletionDate:Apr.2012宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权

4、的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要氧化苦参碱对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其可能机制摘要目的本实验在成功复制出人脐静脉平滑肌细胞(humanumbilicalveinsmoothmusclec

5、ells,HUVSMCs)钙化模型的基础上，以氧化苦参碱（oxymatrine,OMT）进行干预，观察OMT对HUVSMCs钙化的影响，并探讨OMT抑制或延缓HUVSMCs钙化的作用机制。方法在采用β-甘油磷酸盐复制HUVSMCs钙化模型的同时，选择不同浓度OMT进行干预：随机分为对照组（CON）、钙化组(CAL)、单纯OMT组、OMT低、中、高浓度干预组：OMTL、OMTM、OMTH组（在钙化培养液中-6-4-2分别加入10、10、10mol/L的OMT）。检测方法：①HUVSMCs的鉴定：双目倒置相差显微镜下直接观察HUVSMCs；用抗α-平滑肌肌动蛋白（抗α-act

6、in）对第2代HUVSMCs进行免疫组织化学染色。②HUVSMCs的VonKossa染色，观察各组HUVSMCs钙沉积情况。③显微图像分析系统定量计算各组HUVSMCsVonKossa染色钙化阳性细胞百分比。④磷酸苯二钠法测定HUVSMCs内碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）含量的变化。⑤甲基百里香酚蓝比色法测定各组HUVSMCs钙含量，判断钙化程度。⑥酶联免疫吸附法检测HUVSMCs培养液中转化生长因子β1（transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)活性的变化。⑦Westernblot法检测骨保护素(osteoprote

7、gerin,OPG)、骨保护素的受体即核因子kB受体活化因子配体(ligandreceptoractivatorofnuclearfactorkappaB,RANKL)蛋白含量的变化。⑧放射免疫技术检测HUVSMCs培养液中骨钙素（osteocaclcin,OC)含量的变化。I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要结果①HUVSMCs钙化模型复制成功：CAL组与CON组相比，VonKossa染色显示HUVSMCs聚集生长，棕褐色钙化结节明显增加，钙化阳性细胞百分比、细胞钙含量、ALP活性均明显增加(分别P<0.05)。②OMT