以不同羊膜为载体的人角膜缘干细胞原代培养研究

《以不同羊膜为载体的人角膜缘干细胞原代培养研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、贵阳医学院2012届硕士研究生论文中国图书资料分类号单位代码：10660R772.2学号：S090417贵阳医学院2012届硕士学位论文以不同羊膜为载体的人角膜缘干细胞原代培养研究研究生：崔茜导师：刘万丽副教授王健英教授年级：2009级专业：眼科学2012年5月1贵阳医学院2012届硕士研究生论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„6结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„8讨论„„„„„„„„„„„„„

2、„„„„„„„„„„„10参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„15附图„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„20英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„26致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„27缩略词表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„28论文原创性声明„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„29附：综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„302贵阳医学院2012届硕士研究生论文以不同羊膜为载体的人角膜缘干细胞原代培养研究专业：眼科学研究生：崔茜导师：刘万丽副教授摘

3、要目的：观察在完整羊膜与去上皮羊膜两种不同载体上所培养的人角膜缘干细胞的生长特点及P63的表达情况。方法：采用组织块培养法体外扩增培养人角膜缘干细胞，将来自同一供体的2块角膜缘组织随机种植于完整上皮羊膜（A组）和去上皮羊膜（B组）上培养。倒置显微镜下观察培养细胞体外生长的形态及特点，并运用免疫细胞化学方法观察所培养的细胞P63抗体的表达情况。结果：A、B两组细胞（每组10例）分别培养成功8例。两组培养成功的8例细胞均能在体外移行、扩增、连接成片。B组移行扩增的速度较A组快。两组细胞生长至14天时做免疫细胞化学染色，共16孔细胞中均可见P63阳性

4、细胞，其中A组细胞P63阳性率高于B组细胞（P＜0.05）。结论：1.角膜缘干细胞在完整羊膜和去上皮羊膜上均能体外扩增，组织块培养法成功率较高。2.以去上皮羊膜为载体的角膜缘干细胞增殖分化快，体外扩增14天后原始细胞数量较少；以完整羊膜为载体的角膜缘干细胞生长周期长、体外扩增14天后原始细胞数量较多。两组细胞生长14天时，完整羊膜为载体的A组细胞P63阳性率高于去上皮羊膜为载体的B组细胞。关键词:角膜缘干细胞；羊膜；细胞培养3贵阳医学院2012届硕士研究生论文1.前言角膜缘干细胞缺陷病是一组由多种疾病引起的，并导致多种严重角膜及眼表[1-3]变

5、化的眼科疾病，包括眼的酸碱化学烧伤、热烧伤、手术创伤、翼状胬肉、stevens-Johnson综合征、免疫缺陷引起的各种角膜溃疡、严重干眼症、反复发作的病毒性角膜炎、暴露性角膜炎、神经麻痹性角膜炎等。角膜缘干细胞的缺损致使角膜混浊、结膜上皮长入覆盖、角膜基质瘢痕、新生血管形成，从而严重损[4,5]害患者眼表结构及视功能，是一组难治性致盲性眼病，是眼科研究的重点和难点之一。对于此类由角膜缘干细胞缺乏导致的严重眼表疾病，眼表重建手术是[6]治疗的首选方法。眼表重建的概念源于1977年Thoft医生为治疗双眼化学伤患者而实施的自体结膜移植术。该手术虽

6、有一定的临床应用价值，但术后部分患者出现大量角膜基质深、浅层新生血管，并且结膜组织透明度低，影响患者视力[6,7]及外观，之后，随着羊膜在眼科的广泛应用，羊膜移植术也成为眼表重建的常规手术方式之一，但羊膜移植术后的眼表上皮为结膜表型，且对于严重干眼、[8]弥漫性上皮角化和角膜缘缺血等患者疗效甚微。近十年来，随着对角膜缘干细胞功能认识的不断深入，角膜上皮本身被认为是最理想的移植物。角膜上皮移植可恢复角膜表面的光滑度和完整的生物物理屏障以抵御损伤，保持正常的眼表结构和功能。因此，自体和异体角膜缘干细胞移植(1imbalstemcelltranspl

7、antation)被尝试用于眼表重建来治疗角膜缘干细胞缺乏性眼表疾病。随[9]着角膜上皮细胞体外培养方法的建立，1997年Pellegrini等首次报道使用体外培养角膜上皮干细胞成功进行自体眼表重建。此外，由于再生医学和组织工程学的发展，用于体外培养人角膜上皮的角膜缘干细胞需要量大大减少，这使体外培养的自体角膜上皮移植术成为单眼角膜缘干细胞缺乏患者眼表重建的首选方式。近年，许多临床和基础研究都认为在载体上培养角膜缘干细胞并移植能够治疗角膜缘干细胞缺乏。合适的载体应既可以促进体外角膜缘干细胞的生长，又便于移植的进行。目前用作角膜缘上皮干细胞培养载

8、体的物质主要有:胶原膜、同种或异种角膜基质、纤维蛋白、羊膜等。其中以羊膜的使用最为广泛，人羊膜被广泛应用的重要原因是其容易获取，同时具有诸多的优点，其