蛋白激酶b与蛋白激酶c在人骨性关节炎软骨组织中的表达分析

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2、学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)作者签名c手写，：啦泣z2年么月以日导师签名(手写引言骨性关节炎(Osteoarthritis，OA)是膝关节炎症中最常见的类型。膝关节骨性关节炎是老年人群的常见膝关节疾病。随着人类预期寿命的延长，骨性关节炎的发病率明显升高。骨性关节是以关节软骨的退变为主，同时累及滑膜和软骨下骨板的一种慢性炎症性疾病【l-51，其发病机制

3、尚未阐明，可能和生物力学、生物化学及基因突变等因素相关睁引。其中以软骨的退变研究最为广泛，主要包括细胞外基质的丢失【1．3】和软骨细胞的凋亡【9,10]，并有学者提出软骨细胞凋亡在OA软骨损伤过程中发挥着至关重要的作用【11】。蛋白激酶B(ProteinKinaseB，PKB)又称Akt(故写为PKB／Akt)，是一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，其主要功能是促进细胞生长、抑制凋亡。细胞外生物活性物质可通过磷酯酰肌醇．3激酶(Phosphoinositide3Kinase，P13K)途径使PKB／Akt的苏氨酸(Thr308)和C．末端的丝氨酸(Ser473)磷酸化，从而激活

4、PKB／Akt。活化的PKB／Akt能使一系列与凋亡途径相关的蛋白(如：BAD、Forkhead、CREB、MDM2和NF．rd3等)磷酸化，产生抗凋亡生物学效应进而抑制细胞凋亡、促进细胞存活112，嘲。在软骨细胞的体外试验中发现：胰岛素样生长因子．1(Insulin．1ikeGrowthFactorI／IGF—1)和骨形态发生蛋白．2(BoneMorphogeneticProtein-2／BMP．2)介导的软骨细胞存活均通过增加PKB／Akt磷酸化而实现[14A5】。相反，地塞米松(Dexamethasone)和4．羟基壬烯醛(4．Hydroxynonenal)介导的

5、软骨细胞凋亡是通过抑制PKB／Akt的磷酸化而实现[16,17】。因此，PKB／Akt对促进软骨细胞的存活、抑制软骨细胞的凋亡具有积极作用。蛋白激酶C(ProteinkinaseC，PKC)与PKB／Akt具有73％同源性，也可以被生长因子、激素和神经递质等活化，调节细胞的代谢过程。PKCu是经典PKC家族的一员。既往的研究表明PKCa具有直接促进凋亡的作用：在PMA所致的人胃癌MKN45和MKN47细胞凋亡实验中，其促进凋亡的机制主要是通过增加PKCa的活性【博l；在喜树碱(camptothecin)介导人白血病细胞HL60的凋亡中，PKCa的表达显著性升高【191。

6、在软骨细胞的体外研究中也有报道：将钙磷脂结合蛋白V绑定到整连蛋白D5能促进19天鸡胚胎胫骨生长板软骨细胞中PKCa的活性，导致凋亡的增加【201。PKB／Akt和PKC之间存在相互促进或拮抗的作用。Sung等f21】通过对小鼠神经祖细胞的缺氧及再氧合实验发现：抑制PKC的活性会同时抑制PKB／Akt的活性，从而使细胞增殖下降。相反地，Hui等1"221在人气管上皮细胞中和人胎肾细胞中研究发现：通过抑制PKC的活性，可促进PKB／Akt活性。然而，在以软骨凋亡为主要病变特点的人OA中PKB／Akt和PKC两种信号分子的表达意义以及相关性未见报道。本文拟通过形态学和分子生物

7、学方法对OA和正常关节软骨PKB／Akt及PKC蛋白的表达、定位及其与软骨细胞凋亡的关系进行观察分析，明确两种信号分子在OA发病中的意义，为临床上从分子水平寻找治疗OA的新靶位点提供依据。6材料和方法l研究对象1．1实验组OA软骨：取自38例在厦门大学附属中山医院骨科行全膝表面置换术的OA病人，男：8例，女：30例，年龄：49岁--81岁，平均：63．1士11．2岁。OA诊断严格按照美国风湿病学院(ACR)制定的骨性关节炎诊断标准，OA临床分期均为KLl23’241分级三级以上达到手术适应症者，并且通过临床一些指标数据排除有其他代谢性膝关