黄芩素对人肝癌细胞株smmc-7721裸鼠移植瘤的作用机制及其临床意义探讨

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1、中图分类号：R282；R36；R753.7硕士学位论文黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤的作用机制及其临床意义探讨院（系）、所基础医学院研究生姓名冯均建学科、专业病理学与病理生理学导师姓名龙汉安教授二Ο一二年四月目录1黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤的作用机制及其临床意义探讨……………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言……………………………………………………………61.4材料与方法……………

2、………………………………………111.5结果……………………………………………………………241.6讨论……………………………………………………………301.7结论……………………………………………………………361.8参考文献………………………………………………………371.9英汉缩略词对照表……………………………………………412致谢……………………………………………………………423Survivin及其剪接变体在肿瘤的形成中的作用（综述）…43黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤的作用及机制及其临床意义探讨摘要目

3、的：通过将肝癌细胞株SMMC-7721接种于BALB/C(n/n)裸鼠腋窝皮下，复制人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤模型，观察黄芩素干预对SMMC-7721移植瘤组织结构、凋亡及侵袭和转移的影响，并探讨其可能的机制，为黄芩素应用于临床提供实验依据。方法：1.体外复苏、培养人肝癌SMMC-7721细胞，收集对数生长期7的肝癌细胞，将细胞浓度调整到1.5×10/ml，将细胞细胞悬液接种裸鼠腋窝皮下，每只裸鼠接种0.2ml。待成瘤至长径约0.8cm时，对裸鼠进行随机分组并对裸鼠进行编号。实验组裸鼠每天每只腹腔注射黄芩素20m

4、g/kg，连续腹腔注射14d。对照组每天每只腹腔注射二甲亚砜（DMSO）（按黄芩素溶液浓度5mg/ml计算溶解黄芩素所需的DMSO的体积），连续腹腔注射14d。末次用药后24h处死全部裸鼠，充分暴露瘤体使之能被完全剥离，尽快用游标卡尺测量瘤体长径（a）2以及短径（b），瘤体积V=（a+b）/2；瘤体称重，抑瘤率按如下公式计算：抑瘤率（InhibitionRatio,IR）=（1－实验组瘤重/对照组瘤重）×100％。将做RT-PCR组织放入经0.1%DEPC处理过并经高温高压消毒的冻存管中-80℃冻存备用；将做HE染色及免疫组化的组

5、织用4%中性甲醛固定备用。2.用免疫组化方法检测移植瘤内Ezrin及1Survivin蛋白的表达。3.RT-PCR检测移植瘤中Ezrin及SurvivinmRNA表达情况。4.HE染色光镜下观察移植瘤的组织结构。5.实验结果用SPSS16.0进行统计分析，以P﹤0.05视为具有统计学意义。结果：1.实验组肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤体积及重量均显著小于对照组（P﹤0.05），抑瘤率为20.80%±10.27%。2.光镜观察，实验组移植瘤可见较多均质红染的无结构区域；对照组可见癌细胞巢团状分布，细胞有明显的异型性。3.免疫

6、组化结果示，实验组移植瘤中Survivin、Ezrin蛋白的表达水平与对照组相比明显下调（P﹤0.05）。4.RT-PCR结果示，实验组移植瘤Survivin、EzrinmRNA表达水平与对照组相比明显下调（P﹤0.05），结果与免疫组化结果一致。结论：1.实验组肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤体积和重量都明显小于对照组，说明黄芩素对肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤的生长有抑制作用。2.黄芩素可能下调Survivin、EzrinmRNA和蛋白在人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤中的表达。3.黄芩素下调Surviv

7、in的表达降低了Survivin对凋亡的抑制作用，从而促进了肝癌细胞的凋亡。黄芩素下调Ezrin的表达从而抑制了其促进肝癌细胞的侵袭和转移的能力。4.黄芩素有望成为临床治疗肝细胞癌的高效低毒药物。关键词：黄芩素；原发性肝癌；裸鼠移；植瘤；生存素；埃兹蛋白；凋亡2ExploretheRoleandMechanismofBaicaleinonSMMC-7721CellLineXenograftsinNudeMiceandItsClinicalSignificanceAbstract:Objective:Theeffectanditsp

8、otentialmechansimofbaicaleinonthehistologicalstructure,apoptosis,themigrationandinvasionofhumanhepatocellularcarcinomacellst