mir-200b靶向zeb2调控小细胞肺癌多药耐药性研究

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文MiR．200b靶向ZEB2调控小细胞肺癌多药耐药性研究ZEB2contributesmulti—drugresistanceofsmallcelllungcancerandisregulatedbymiR一200b课题来源：自选专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员肿瘤学曾香萍郭琳琅教授陈尊器教授张为民教授夏建川教授黄宗海教授汪森明教授论文评阅人葛日萍教授．曹漫明教授2012年5月2日广州硕士学位论文miR．200b靶向ZEB2调控小细胞肺癌多药耐药

2、性研究硕士研究生：曾香萍指导教师：郭琳琅摘要研究背景肺癌是当今世界上对人类健康危害最大的恶性肿瘤之一，全国肺癌协会最新发布的调查资料显示我国肺癌的发病率已高居各类恶性肿瘤首位。根据肿瘤组织形态学的不同，肺癌主要分为小细胞肺癌(smallcelllungcancer，SCLC)和t114,细胞肺癌(non．smallcelllungc锄c％NSCLC，包括腺癌、鳞癌和大细胞癌)，小细胞肺癌是支气管肺癌中未分化癌分型，约占全部肺癌15％，由于较早发生血行转移及淋巴转移，预后极差。虽然小细胞肺癌患者对化疗药

3、物敏感，但由于极易出现多药耐药(multidmgresistance，MDR)而导致治疗失败，而且MDR导致的小细胞肺癌复发率很高，临床预后差，因此，化疗抗药性已成为近年来小细胞肺癌临床治疗急需解决的重要问题之一。锌指转录因子snail超家族由snail、E12／FA7、ZEBl、ZEB2及Slug五个成员组成，参与细胞分化、增殖和凋亡等重要生物过程。研究发现snail基因家族发生异常表达，可导致个体发育和组织器官形成过程中出现异常形态结构，并在前列腺癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等恶性肿瘤的发生和发展中起着

4、重要作用，snail家族基因还参与肿瘤细胞耐药和凋亡的调节。研究发现ZEB2在人，大鼠组织中广泛表达，尤其是心脏，神经组织。ZEB2结合E．cad基因启动子区的E．box序列，抑制E钙黏蛋白、细胞角蛋白(cytokeratin)、黏蛋白，mac．1和桥粒蛋白摘要的转录。这些蛋白表达的下调，尤其是E钙黏蛋白表达的下调，对于上皮间质转化(epithelialmesenchymaltransition，EMT)起着非常重要的作用。ZEB2基因作为snail基因家族中的重要成员，与多种肿瘤的发生、发展、转移及

5、预后密切相关。研究发现ZEB2与膀胱癌对表皮生长因子抑制剂耐药、卵巢癌对顺铂耐药密切相关。然而，ZEB2基因是否参与小细胞肺癌细胞的凋亡和耐药产生，目前尚无相关报道。MicroRNA(miRNA)是长度为19．25nt的单链非编码核苷酸分子，具有高度的进化保守性，通过对靶mRNA的降解或者翻译抑制，广泛参与动植物细胞的生长发育、分化、增殖与凋亡、激素分泌及肿瘤形成等多种重要生物过程。研究发现miRNA与肿瘤耐药的产生也有着密切的关系。下调miRNA．200c表达，乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性降低。在急性

6、早幼粒细胞白血病中，miRNA．125b的高表达，可增加其对化疗药物的抗药性。在结直肠癌中，上调miRNA．224可增加其对甲氨蝶呤的耐药性。有研究发现非小细胞肺癌(NSCLC)组织中经常发生miRNA．128b杂合性的缺失，miR．128b能够靶向调控表皮生长因子受体，与患者对吉非替尼的敏感性及生存率有关。我们采用miRNA芯片比较分析小细胞肺癌耐药细胞H69AR和非耐药细胞H69中miRNAs的表达差异性，结果发现61个miRNAs出现表达异常，其中miR．375、miR．200b等24个miRN

7、As表达上调，而miR．100、miR．224等37个miRNAs表达下调，芯片结果得到了实时定量PCR的验证。miR一200家族包括miR．200a，miR一200b，miR．200e，miR．141，miR一429五个成员。很多研究表明，miR．200家族靶向两个重要细胞转录抑制因子，即锌指E盒子结合同源框l(ZincfingerE—box—bindinghomcoboxI，ZEBl)和锌指E盒子结合同源框2(ZincfingerE-box—bindinghomeobox2，ZEB2)，调节上皮间

8、质转化(Epithelial．mescnchymaltransitions，EMT)及间质上皮转化(mesenchymal—epithelialtransitions，MET)，从而影响肿瘤发生、发展、转移、耐药等生物学行为。miR一200b是重要成员之一，生物信息学软件分析发现miR．200b的靶基因多达7000多个。Christoffersen通过原位杂交技术，检测到大U硕士学位论文鼠大脑中miR．200b与ZEB2mRNA共同表达，上调miR．20