基因芯片法快速检测结核分枝杆菌katg、inha和rpob基因突变及其和inh和rfp耐药相关性的研究

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1、苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口．本学位论文属在年～月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：盈丝犟日期：趁垒：￡：f羔一导师签名i燃日期：乙豇垒：．￡：!

2、[基因芯片法快速检测结核分枝杆菌KatG、inhA和rpoB基因突变及其与INH和RFP耐药相关性的研究中文摘要中文摘要中又捅斐由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)感染引起的肺结核(Pulmonarytuberculosis，PTB)是世晃范围内的重大流行病和传染病。抗结核常规有效药物异烟肼(INH)、利福平(RFP)等对耐多药(Multipledrugresistant—tuberculosis，MDR—TB)及广泛耐药结核的治疗是无效的，对此类肺结核的早期、快速和灵敏诊断有利于临床采取有效、合理的治疗药物与方案。利用基因芯片技术对耐多药结核的诊断具

3、有快速，灵敏和高通量等许多优点。采用罗氏固体培养法对结核分枝杆菌进行传统药敏试验；利用博奥公司生产的晶芯㈤结核分枝杆菌耐药检测试剂盒和相关仪器通过核酸提取、PCR扩增、芯片杂交与清洗和芯片扫描，分别对结核分枝杆菌的INH和RFP耐药相关基因KatG315、inhA一15和rpoB常见突变位点进行检测和药敏判断；通过抽提结核分枝杆菌基因组DNA，采用PCR扩增KatG和rpoB基因片段，核酸电泳鉴定后进行纯化和测序；将基因芯片检测的耐药情况与传统药敏试验结果的一致性进行分析，并将基因芯片法检测的位点突变情况与DNA测序结果进行比较分析。基因芯片法的研究结果表明：(1)相对于inhA一15突变(

4、C_T)，苏州地区结核分枝杆菌INH耐药相关基因KatG主要突变形式为(AGC---，ACC)Ser--,Thr(S315T)，占耐药突变总比例的96．3％；以罗氏固体培养法获得的INH耐药结果为标准，基因芯片法对菌株INH药敏检测的准确率为73．8％；以DNA测序法结果为标准，基因芯片法对KatG315突变型检测的准确率为88．9％。(2)苏州地区结核分枝杆菌RFP耐药相关基因rpoB主要突变形式为RRDR一531(TCG---，TTG)Ser-+Leu为主要突变形式，占检测标本rpoB—RRDR相关位点总突变的76．9％；以罗氏固体培养法获得的RFP耐药结果为标准，基因芯片法对菌株药敏检

5、测的准确率为93．3％；以DNA测序结果为标准，基因芯片法对rpoB基因的RRDR相关位点的检测的准确率为82．4％。上述研究获得部分的结果已整理成文，并在投稿中。关键词：基因芯片；结核病；异烟肼；利福平；耐药作者姓名：唐佩军指导教师：张学光DetectionofKatG,inhAandrpoBGeneMutationsofMycobacteriumTuberculosisthroughDNAMicr—o---agb,7r--r_a_ryandStudytheirCorrelationswithINHandRFPResistanceAbstractPulmonarvtuberculosis(

6、PTB)causedduetoinfectionofMycob’acteriumtuberculosisisamajorworldwideepidemicandinfectiousdisease-Conventionale仃ectiveanti劬erculosisdrugssuchasisoniazid(rNH)andrifampicin(RFP)盯einvalidfortreatmentofmultipledrugresistant—tuberculosis(MDR·TB)andextensivelydrug-resistanttuberculosis．Earlystage，rapidan

7、dsensitivediagnoslsof8uchtuberculosismaycontributetotheadoptionofeffectiveandrationalclinicaltherapeutlcdrugandprogf锄s．DNAmicroarraybeingappliedtodiagnosisofMDR-TBisTapldandsensitivewithhighthroughput．Lowen