紫草等中药多糖免疫调节活性的研究

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1、硕士学位论文中文摘要紫草等中药多糖免疫调节活性的研究中文摘要近年来，植物多糖已作为有生物活性的天然产物中的一个重要类型出现。研究发现植物多糖具有广泛的药理作用：具有免疫调节作用，激活巨噬细胞、T淋巴细胞、LAK细胞等多种免疫细胞，促进细胞因子生成，活化补体；抗肿瘤、抗感染、抗病毒、抗消化性溃疡、抗氧化等，而且毒性相对较低，因此越来越受到研究人员的重视【1'21。本课题选择了临床上用于治疗感染性疾病的常用中草药紫草、柴胡、鱼腥草、杜仲，研究这4种传统中药多糖提取物的抗炎及免疫调节活性。本课题主要是通过检测

2、紫草、柴胡、鱼腥草、杜仲多糖对正常健康人外周血单个核细胞(PeripheralBloodMononuclearCells，PBMC)以及．LPS活化PBMC表达炎症相关细胞因子的影响，探讨其抗炎和免疫调节活性的分子机制。我ffJSU用real-timeRT-PCR法检测烈F一0‘、IL一10、IFNy、IL．4、IL．18及相关细胞因子基因转录水平，通过Western．blot检测PBMC中ERK磷酸化水平。初步结果显示，紫草等中药多糖可调节TNF．Q、IL．10、IFN．Y、IL．4、IL．18及相关

3、细胞因子基因的转录，具有抗炎及调节天然免疫应答的功能；且紫草多糖可能是通过抑制PBMC的MAPK信号通路进而抑制LPS诱导的炎症相关细胞因子TNF．仅等高表达。为紫草等中药多糖作为抗炎、免疫调节药物的临床应用提供了理论依据。一、中药多糖诱导TNF．a及IL．18等相关细胞因子的表达本实验主要观察紫草、柴胡、鱼腥草、杜仲多糖对正常健康人PBMC表达TNF．0【、IL一10、IFNl,、IL．4、IL．18、IL．18BP、IL．18Rot、IL．18RB的影响。首先用紫草、柴胡、鱼腥草、杜仲多糖分别处理P

4、BMC，4tl、24h后利用real．timeRT-PCR检测细胞因子转录水平。结果显示，与未处理组相比，紫草、柴胡、鱼腥草、杜仲多糖在处理PBMC早期(4h)，均可增强PBMCTNF一伐、IL．10、IL．18的转录，而抑制IL一18BP的转录；而在处理晚期(24h)，对所测的细胞因子表达无明显影响。提示多糖对细胞因子转录水平的影响主要在处理早期。我们进一步检测了紫草等中药多糖处理PBMC后，不同时问点(1h、2h、硕士学位论文中文摘要6h、12h、24h)上述细胞因子的转录水平。结果显示，紫草多糖增

5、强TNF．13t,的转录，2h时达高峰，是未处理组的4．1倍；柴胡多糖增强TNF．0c的表达，1h时达高峰，是未处理组的6．6倍；鱼腥草、杜仲多糖均增强TNF．0c的转录，6h时达高峰，分别是未处理组的7．8倍、2．1倍。紫草、柴胡、鱼腥草多糖均增强IL．10的表达，6h时达高峰，分别是未处理组的5．3倍、2．5倍、3．3倍。紫草、柴胡、鱼腥草多糖均可增强IFN),的表达，6h时达高峰，分别是未处理组的4．6倍、5．7倍、5．2倍。柴胡多糖在处理PBMC早期，可增强IL．4的表达，2h时达高峰，是未处理

6、组的3．9倍；紫草、鱼腥草多糖均增强IL．4的转录，6h时达高峰，分别是未处理组的2．8倍、3．5倍。柴胡、鱼腥草多糖处理PBMC，可增强IL．18的表达，2h时达高峰，分别是未处理组的2．1倍、3．3倍；而抑制IL．18BP的表达，于12h时作用最强，分别是未处理组的23．5％、31．9％。紫草多糖可增强IL．18Rot、IL．18R13的转录，6h时达高峰，分别是未处理组的1．8倍、2．6倍。研究证明紫草、柴胡、鱼腥草、杜仲多糖可调节TNF．叭IL．18等相关细胞因子基因的转录，具有抗炎及调节天然免

7、疫活性的功能，且对哺乳动物细胞无明显的毒性作用，为其作为抗炎、免疫调节药物及其抗炎机制研究奠定基础。二、紫草多糖对LPS活化的PBMC表达炎症相关细胞因子的影响为了研究紫草多糖的抗炎活性，我们检测了紫草多糖对LPS活化的PBMC表达TNF一0【、IL一10、IL-18、IL．18BP、IL．18Ra、IL．18R13的影响。结果显示，LPS处理PBMC早期(4h)可增强TNF．0c、IL．18的转录，而用紫草多糖处理可抑制LPS活化的PBMCTNF．0【、IL．18的表达(抑制率达15～50％)。LPS

8、可激活MAPK通路诱导致炎因子的转录，为了研究紫草多糖抑制LPS诱导的致炎因子TNF．a转录的机制，我们用紫草多糖分别处理LPS活化的4个正常健康人PBMC，利用Western—blot检测MAPK通路中关键蛋白ERK磷酸化水平。结果显示，LPS可诱导PBMC的ERK磷酸化，紫草多糖处理可抑制LPS诱导的ERK磷酸化，抑制率达39％---73％。提示紫草多糖可能是通过抑制PBMc的MAPK信号通路进而抑$1JLPS诱导的致炎因子TNF．a等