蒽酮法测还原糖

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1、总糖的含量的测定（蒽酮法）一、实验目的掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。对于以上特定的糖类反应较稳定。三、实验器材1.吸管2.试管3.分光光度计4.水浴锅5.电炉6.电子分析天平四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000ml体积分数为80%的硫酸中，当时配制使用。2．标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：

2、100mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。3．6mol/lHCl溶液。1．10%NaOH溶液：称取10gNaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100ml。一、实验操作1.制作标准曲线取干净试管7支，按下表进行操作。表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作管号步骤0123456标准葡萄糖溶液/ml00.10.20.30.40.50.6蒸馏水/ml1.00.90.80.70.60.50.4置冷水中5min蒽酮试剂/ml4.04.04.04.04.04.04.0沸水浴中准确煮沸10min，取出，用自来水冷却，室温放置10min，在620min比色。A62

3、0nm2.样品的处理（见实验四）取上述实验四的水解液，冷却后用10%NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液10ml，用蒸馏水定容于100ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。测定时取1ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。样品中糖含量的计算：×100%CVｗ＝ｍw—糖的质量分数（%）；C—从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)；V—样品稀释后的体积（ml）；m—样品的质量（mg）。