共振光散射新方法定量地分析蛋白质

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1、薛蓓兰州大学硕士学位论文2008共振光散射新方法定量分析蛋白质中文摘要共振光散射(RLS)光谱法二十世纪90年代发展起来的一种分析测试新技术。1995年，共振光散射技术作为一种研究生色团聚集的方法被Pastemack正式提出。随着共振光散射技术在理论和分析方法上的日趋成熟，共振光散射技术以其简单的操作，较高的灵敏度广泛应用于蛋白质、核酸、药物、细胞、金属离子、非金属离子、纳米粒子和表面活性剂等的分析。共振光散射法与一般的荧光法相比有更高的灵敏度，可以用于稀溶液的研究；检测更为方便，并可研究共振光散射光谱特征；可为

2、研究分子结构和反应特征提供更丰富的信息；共振瑞利散射对于大分子非键作用，如缔合、聚集、偶极-偶极作用、长距离组装非常敏锐，这对于生物大分子的测定、表征及反应历程的研究极为有利。但是共振光技术还存在着不足之处，譬如抗干扰能力不强，其共振光散射信号易受到外来共存物质的干扰；重现性不好；油溶性试剂中使用不便等。本论文在总结前人工作基础上，对共振光散射法测定蛋白质进行了创新性的研究：1、将自行组装的流动注射装置与荧光光谱仪联用，确立了流动注射．共振光散射联用测定人血清样品中蛋白质含量的新方法，提高了共振光散射技术的重现性

3、和稳定性。2、建立了聚乙二醇辛基苯基醚．蛋白质．亮丽春红5R三元体系检测人血清中蛋白质含量的新方法，提高了检测的灵敏度。论文共分为三章：第一章：简要介绍了共振光散射技术的原理和应用，以及共振光散射分析新方法的发展。并且对实验中用到的表面活性剂的在共振光散射检测中的应用进行了简单综述。第二章：用十二烷基硫酸钠作为探针，在流动注射．共振光散射联用系统中在线测定人血清中蛋白质的含量。该体系对人血清白蛋白检测的线性范围在3．0—28．0lag／mL之间，检测限为70ng／mL，检测结果的相对标准偏差不大于2．12％，样品

4、回收率在薛蓓兰州大学硕士学位论文200897．83．106．09％之间。该方法克服了不稳定体系重现性较差的缺点，分析速度快，灵敏度高，实现了蛋白质的在线检测。第三章：基于在pH2．1l的酸性溶液中，聚乙二醇辛基苯基醚(OP)对亮丽春红5R-蛋白质体系的共振光散射信号有强烈的增敏现象，建立了聚乙二醇辛基苯基醚．蛋白质．亮丽春红5R三元体系测定人血清中蛋白质浓度的新方法。该体系对人血清白蛋白检测的线性范围在O一10．0lag／mL之间，检测限为5ng／mL，检测实际样品的回收率在97．80．109．62％之间，该方法

5、令人满意。薛蓓兰州大学硕士学位论文2008NovelRayleighlightscatteringmethodsforquantitativeanalysisofproteinAbstractRayleighiishtscattering(RLS)isanewtechnologydevelopedin1990sfortraceanalysis．ItwasfoundedbyPastemalketalin1993．TherearemoreresearchesandapplicationsofRLSrecently．I

6、tiswidelyusedintheresearchanddeterminationofproteins，nucleicacids，carbohydrates，medication，non—particle，inorganicparticlesandsurfactantsandshowsgreatforegroundofuse．Comparingwithothermethods，theRLSmethodhasmoreaeuminoussensitivity,moresimplemanipulation．Andit

7、isabletoprovidedetailsformolecule’Sconfiguration．However,theRLSmethodhasdisadvantageinreproducibilityandstability．Inthisdissertation，onthebasisofthepreviousresearch，novelRayleighlightscatteringmethodsweredevelopedtoinvestigatethequantificationofproteinsinhuma

8、nbloodserum．Thefollowingmajorinnovativeworksworecarriedout：l：TheflowinjectioncombinedwithRayleighlightscatteringtechniquewasusedtoquantifytheproteininhumanserumsamples．Thehomemadeinstrume