去甲斑蝥素对胆管癌rbe细胞作用及其机制地研究论文

《去甲斑蝥素对胆管癌rbe细胞作用及其机制地研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、目一录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4研究论文去甲斑蝥素对胆管癌RBE细胞作用及其机制的研究—LL—jL．日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．14附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17附表⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．29结论⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．33综述去甲斑蝥素抗肿瘤作用研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．36致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．45个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．46中文摘要去甲斑蝥素对胆管癌RBE细胞作用及其机制的研究摘要目的：研究去甲斑蝥素对胆管癌RBE．TCHUl79细胞的凋亡、凋亡相关蛋白、细胞周期、细胞骨架、超微结构的影响，探讨去甲斑蝥素对胆管癌RBE细胞的作用及其机制。方法：lMTT实验：将对数生长期细胞种于96孔板中，

3、待贴壁后加入200kd含0、5、10、20、401xg／ml浓度去甲斑蝥素的RPMll640培养基，分别培养24、48、72小时。后每孔加入MTT工作溶液，温箱中作用4小时，用1509lDMSO溶解结晶，在酶标仪上读取吸光度值。实验重复3次。2流式细胞仪检测凋亡率检测：收集24小时同上浓度实验组及阴性对照组细胞，PBS洗涤3遍后重悬于BindingBuffer中，先后加入AnnexinV-FITC及PI，于流式细胞仪上检测。3流式细胞仪分析细胞周期分布：对数期生长的RBE细胞应用同上浓度的去甲斑蝥素干预24小时，收集并固定于预冷的70％乙醇中，4V过夜，离心去除乙醇，PBS

4、洗涤后加入PI染色，于流式细胞仪上机测试。4瑞氏．姬姆萨染色观察细胞形态：RBE细胞种于六孔板中，加入不同浓度去甲斑蝥素的培养基中培养24小时。瑞氏．姬姆萨染料固定后加入蒸馏水染色，立即在油镜下观察。5AO／EB染色法观察细胞凋亡及形态：细胞以上述同样的方式处理后，盖在A伽B染液中染色，荧光显微镜下观察。6Westernblot检测bax、Actived．caspase一3和细胞色素c表达：细胞经过去甲斑蝥素作用24小时，收集后提取总蛋白或胞浆蛋白，经过分离、转膜、封闭、一抗、漂洗、荧光二抗、漂洗后上机扫描。7免疫组化染色观察Q—Tubulin分布变化：RBE细胞同上分组去

5、甲斑蝥素处理，固定，滴加一抗、孵育、滴3n_抗、增强显色、DAB显色，梯度酒精脱水干燥，中性树胶封固。8Real。timePCR检测mRNA转录水平：收集去甲斑蝥素作用24小时后细胞，提取总RNA，合成eDNA。bax、bcl．2、Caspase．3及内参I]-actin中文摘要按各自反应体系配比，于荧光PCR仪检测。9扫描电镜观察去甲斑蝥素诱导RBE细胞膜表面超微结构变化：RBE细胞经去甲斑蝥素作用12小时、戊二醛固定、脱水、真空干燥、镀金后于扫描电子显微镜观察。10透射电镜观察去甲斑蝥素诱导RBE细胞超微结构变化：RBE细胞经去甲斑蝥素干预12小时，收集细胞团块经戊二醛

6、固定、锇酸固定、丙酮梯度脱水，环氧丙烷置换，环氧树脂包埋、聚合、超薄切片、醋酸双氧铀．枸橼酸铅染色，透射电镜观察。结果：1MTT实验显示去甲斑蝥素对胆管癌细胞生长呈抑制作用，不同浓度去甲斑蝥素不同时间作用于胆管癌RBE细胞，其抑制率呈时间一剂量依赖关系(尸

7、甲斑蝥素作用24小时使RBE细胞阻滞在G2／M期，与对照组相比具有统计学意义(P=-O．000，P=-0．000，P=0．ooo,P