rubicon在心脏自噬及心功能中的作用研究

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1、上海交通大学硕士生毕业论文Rubicon在心脏自噬及心功能中的作用研究摘要最近的研究表明，Rubicon可以负向调节PI3KC3/VPS34的活性，从而抑制自噬小体的成熟。然而，Rubicon具体的生理功能还不明确。我们推测小鼠体内Rubicon缺失后可以提高心脏的自噬水平，从而在心脏功能中发挥一定的作用。我们在piggyBac转位制备的Rubicon敲除小鼠中，检测Rubicon在mRNA水平以及蛋白水平上的表达情况，确定Rubicon基因已经完全失去活性；并发现Rubicon敲除小鼠的出生率不受影响，符合孟德尔遗传定律。通过用巴弗洛霉素A1阻断自噬体成熟后，在Rubico

2、n敲除小鼠心脏中LC3II的表达量明显高于野生型小鼠，通过苏木精-伊红染色和天狼星染色发现Rubicon敲除小鼠与野生型小鼠的心脏形态没有显著差异。心脏功能超声检测中同样发现在不同年龄阶段（2月龄，8月龄，12月龄）的Rubicon敲除小鼠中，射血分数（EF）和左心室短轴缩短率(FS%)，这两个心脏功能的指标与野生型小鼠没有显著差异。我们在革兰氏阴性菌脂多糖（LPS）诱导的小鼠脓血症模型中发现LPS处理的Rubicon敲除小鼠的存活时间明显高于野生型小鼠。在LPS腹腔注射12小时后，Rubicon敲除小鼠心脏中的自噬水平也明显1万方数据上海交通大学硕士生毕业论文高于野生型小鼠

3、。同时，实时定量PCR没有检测到炎症因子表达的显著差异。综上所述，我们首次发现了Rubicon缺失在小鼠心脏中可以提高自噬活性，但在基底水平对心脏的结构和功能没有显著影响；然而在LPS诱导的小鼠脓血症模型中延长了小鼠的存活时间，并可以改善小鼠心脏每搏量以及心输出量。关键词：Rubicon；自噬；心脏功能；炎症；心脏。2万方数据上海交通大学硕士生毕业论文RUBICONINAUTOPHAGYANDCARDIACFUNCTIONABSTRACTRubiconhasbeensuggestedtosuppressautophagosomematurationbynegativelyre

4、gulatingPI3KC3/Vps34activity.However,thephysiologicalfunctionofRubiconremainselusive.WehypothesizedthatRubicondeficiencyenhancesautophagicfluxintheheartandaffectscardiacfunction.Rubiconknockout(KO)miceweregeneratedbypiggyBactransposition.LossofRubiconwasdemonstratedatbothmRNAandproteinlevel

5、s.RubiconKOmicewereborninMendelianratios.Autophagicflux,assessedbybafilomycinA1-inducedchangesinLC3IIproteinabundance,wasenhancedintheheartofRubiconKOmicecomparedtowildtype(WT)controls.Hematoxylin-EosinstainingandPicrosiriusredstainingshowedthatRubiconKOmiceexhibitednormalbaselinecardiacmor

6、phology.Echocardiographyrevealedthatejectionfractionandfractionalshortening,twoindicesofcardiacfunction,werecomparablebetweenRubiconKOmiceat2,8and12monthsofage(n=6-8foreachagegroup)andthecorrespondingWTcontrols(n=6-8for3万方数据上海交通大学硕士生毕业论文eachagegroup).Inamousemodeloflipopolysaccharide(LPS)-i

7、nducedsepsis,thesurvivaltimeofLPS-treatedRubiconKOmice(n=10)wasprolongedcomparedtoLPS-treatedWTcontrols(n=11).EchocardiographyrevealedthatRubicondeficiencypartiallynormalizedLPS-inducedreductioninstrokevolumeandcardiacoutput12hours(h)afterLPSadministrati