mir-92b-3p抑制食管癌浸润转移机制研究

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1、万方数据北京协和医学院中国医学科学院博士研究生学位论文博士学位论文学校代码：10023miR-92b．3p抑制食管癌浸润转移机制研究miR-92b一3pRepressesInvasionandMetastasisofEsophagealCancerbyTargetingITGA6andRAB23所院：姓名：指导教师：导师小组：肿瘤医院马刚刘芝华教授詹启敏教授林晨教授学科专业：细胞生物学研究方向：肿瘤浸润转移完成日期：2014．04万方数据北京协和医学院中国医学科学院博士研宄生学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．2前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4材料方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．62结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．73参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．74基金资助⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯97文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯．98致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯114个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯116学位论文原创性声明和授权使用说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯117万方数据北京协和医学院中国医学科学院博十研究生学位论文图表索引表1参与肿瘤浸润转移调控的microRNAs⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10表2KYSE．30／180／450／510细胞株特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．16表3miR一92b一3pmimics／inhibitor及对应NC的序列⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯18表4实验中所使用的克隆、检测及突变PCR引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18表5本实验中使用的试剂盒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20表6实验中使用的抗体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20表7实验中主要使用的细胞和生化分子试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21表8实验中主要使用到的仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28表9RNA逆转录反应体系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35表10实时荧光定量PCR反应体系配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35表ll实时荧光定量P

5、CR循环参数⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36表12PhusionDNA聚合酶反应体系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．36表13克隆PCR循环参数⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37表14PCR片段双酶切反应体系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37表15DNA与载体的连接体系(T4连接酶)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37表16不同稀释度的BSA标准液⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38表17突变PCR反应体系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38表18突变PCR循环参数⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39表19miR．92b．3p靶分子预测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52图l肿瘤细胞经过多个步骤完成远端转移⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4图2细胞采用的两种基本运动模式⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5图3细胞运动元件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8图4hsa-miR．92b序列信息⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13图5pcDNA3一myc、plSO、pGL3一Basic和pLvx—IRES-Neo图谱⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17图6采用反向PC

7、R法突变特定DNA序列的原理图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．38图7食管癌原位浸润实验步骤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．42图8食管癌细胞chemotaxis体外筛选模型⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43图9microRNA芯片结果及qRT-PCR验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44图10miR．92b．3p在体外实验中抑制食管癌细胞的运动和浸润能力⋯⋯⋯⋯⋯．46图11miR．92b．3p抑制食管癌发生局部浸润⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47图12miR-92b．3p抑制食管癌发生肺转移⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯．．48Tl万方数据北京协和医学院中国医学科学院博士研究生学位论文图13miR-92b．3p不影响食管癌细胞的增殖⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49图14miR．92b一3p不诱导食管癌细胞发生凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51图15miR-92b一3p靶分子的预测及初步实验验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53图16ITGA6；fURAB23是miR一92