hnp-1诱导huvec内皮细胞表达白介素-8及其信号通路的研究

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1、万方数据中图分类号UDCR543．3+l610硕士学位论文学校代码10533HNP．1诱导HUVEC内皮细胞表达白介素．8及其信号通路的研究E船ctofinterleukin一8productioninducedbyhumanneutrophilpeptide一1inHUVECandthemechanismofsignalingpathway作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：丁琦临床医学内科学湘雅三医院欧阳茂副教授论文答辩日期2陛!竺：叫答辩委员会主席中南大学2014年05月万方数据学位论文原创性声明

2、IIIIIII1[1

3、111IIIlUlIIIY2688545本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：丝!兰年!』月兰Z日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论

4、文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：了蔼日期：鲨监年翊驾日翩签名世泌，，～日期：逃年土月旦日万方数据HNP．1诱导HUVEC内皮细胞表达白介素一8及其信号通路的研究摘要目的：探讨人中性粒细胞多肽一1(m岬．1)能否诱导人脐静脉内皮细胞(HⅣEC)表达IL一8及其信号通路。方法：1．以浓度为10．00pg／ml的HNP．1干预HUVEC不同时间(Oh、3h、6h、9h、12h)，再以不同浓度(0．625

5、pg／ml，1．250pg／ml，2．50099／ml，5．00099／ml，10．00pg／m1)的HNP．1干预HUVEC12h，分别提取总RNA，采用RT-PCR法分别测定IL．8mRNA的相对表达量。2．采用RT-PCR法确定HUVEC表达P2Y6mRNA，以10．0099／ml的HNP．1干预HUVEC12h，采用RT-PCR法测定特异性P2Y6拮抗剂MRS2578预先干预HUVEC前后HNP．1诱导IL一8mRNA的相对表达量。3．采用RT-PCR法测定特异性MEK抑制剂、P13K抑制剂干预HUVEC前后HNP．1诱导IL一8mRN

6、A的相对表达量，采用westernblot法测定HNP．1干预HUVEC后ERKl／2、AKT的磷酸化水平。4．采用westernblot法测定P2Y6拮抗剂MRS2578干预HUVEC前后HNP．1诱导的ERKl／2的磷酸化水平。5．采用westemblot法测定MEK抑制剂、P13K抑制剂干预HUVEC前后HNP一1诱导的ERKl／2、AKT的磷酸化水平。结果：1．在12h内，随着干预时间的延长，IL一8的表达量逐渐增多，与空白组相比，各时间点的IL一8的表达量升高均有统计学意义(P<0．05)；随着HNP．1浓度的升高，IL．8的表达量亦

7、逐渐升高，从浓度达到5ptg／ml开始IL一8表达量的升高具有统计学意义(PO．05)，而采用5洲的MRS2578预孵育，IL．8的表达受到明显抑制(P<0．05)，但仍高于阴性对照组组(P

8、干预细胞后，ERKl／2的磷酸化程度明显增强，在5min达峰(P<0．05)，而后随时间延长磷酸化程度逐渐减弱，而AKT却没有明显的磷酸化(P>0．05)。4．HNP一1干预细胞5min后，ERKl／2明显磷酸化(P<0．05)，以lgMMRS2578预先孵育细胞，ERKl／2磷万方数据酸化程度无明显降低(P>0．05)，而以5pMMRS2578预先孵育细胞，ERKl／2磷酸化程度明显降低(P

9、P<0．05)，而HNP．1诱导的ERKl／2的磷酸化水平亦有一定程度的降低(P<0．05)，以MEK抑制剂阻断ERKl／2通路后，ERKl／2的磷酸