hcv ns3解旋酶rna对hcv自身翻译具有抑制作用

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1、中图分类号Q窆三二3UDC570硕士学位论文学校代码!Q§33密级公珏HCVNS3解旋酶RNA对HCV自身翻译具有抑制作用InhibitionofHCVtranslationbyHCVNS3helicasehellcaseRNA则A作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：刘晓蕾生物学微生物学基础医学院刘水平副教授论文答辩日期211l：篁丛答辩委员会主席中南大学2013年5月缉原创性声明嗍Y嗍2㈣42㈣2咖7㈣38矾本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所

2、知，除了论文中特另JDFi以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：k生年』月注日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研

3、究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作老"l：l公、、_A&q幺--I：查华凌导师签日期：耸裎／月也日HCVNS3解旋酶RNA对HCV自身翻译具有抑制作用摘要：丙型肝炎病毒是丙型肝炎的病原体，可导致慢性肝炎、肝硬化，部分可发展成肝癌。目前较为认可的治疗方案是干扰素联合利巴韦林，但它的副作用较大，花费较高，持续应答率较低。因此，寻找更为有效的抗HCV治疗方法迫在眉睫。由于HCV在体内复制水平低，难以建立一个令人满意的高效体外复制、感染模型。因此，对HCV生活周期以及

4、其内部基因表达调控的研究显得非常重要。本课题在研究HCVNS3解旋酶对HCVIRES的翻译启动活性的影响，并试图探讨HCV翻译自身调控的机制。方法：(1)构建HCVNS3全长和HCVNS3解旋酶表达质粒；构建HCVNS3解旋酶的突变型及其表达缺陷质粒；(2)以HCVIRES调控荧光素酶表达的质粒pCMVNCRLuc转染293T细胞模型作为研究体系，利用磷酸钙转染方法，将构建的质粒转染到该细胞中，转染24h后检测荧光素酶表达活性；(3)提取细胞RNA，RT—PCR检NUpCMVNCRLuc、细胞IFN．D和PKR

5、的mRNA的相对表达。结果：(1)质粒酶切鉴定和测序结果证明正确构建了HCVNS3解旋酶及其突变型和表达缺陷质粒；(2)体外细胞转染，HCVNS3解旋酶及其突变型表达质粒均可抑制转染细胞的荧光素酶表达，HCVNS3解旋酶表达缺陷质粒同样可抑制转染细胞的荧光素酶活性；(3)RT—PCR检测显示，转染细胞中质粒pCMVNCRLuc和转染内参质粒pRL．TKmRNA的相对表达水平无显著性差异；细胞中未检测出IFN—B表达，PKRmRNA的相对表达水平无显著性差异。结论：(1)成功构建了HCVNS3解旋酶及其突变型以及

6、表达缺陷真核表达质粒；(2)HCVNS3解旋酶RNA可抑制HCVIRES的翻译启动活性；(3)HCVNS3解旋酶RNA对HCVIRES翻译启动活性的抑制不是通过提高PKR的表达水平发挥作用，具体机制有待进一步研究。图15幅，表3个，参考文献37篇关键词：丙型肝炎病毒；NS3解旋酶；突变型质粒；荧光素酶；翻译启动分类号：Q93．3ⅡInhibitionofHCVtranslationbyHCVNS3helicaseRNAAbstract：HepatitisCvirus(HCV)iSflmajorcauseofch

7、ronichepatitisandtheleadingcauseofend．stage1ivercirrhosisandhepatocellularcarcinoma．ThebestavailableHCVantiviraltherapyisacombinationofpegylatedinterferon—a(IFN一0【)andribavirin—basedtherapy．However，becauseofitssideeffect，highcostand10Wsustainedvirologicalres

8、ponse，searchingforamoreeffectiveanti—HCVtherapeuticmethodisconsideredtobeurgent．DuetothelOWlevelofHCVreplicationinvivo．itiShardtobuildasatisfactoryandemcientreplicationandinfectionmodelinvitro．T