e1a通过e6e6ap增强宫颈癌放疗敏感性的机制研究

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1、万方数据中图分类号屋!垒Z乡UDC3tD硕士学位论文学校代码!Q量三三密级公珏E1A通过E6／E6AP增强宫颈癌放疗敏感性的机制研究MolecularmechanismofE1A．mediatedradiosensitivitybyinterferingwithE6／E6APinteraction作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期2翌!芏!兰!兰7王颖临床医学肿瘤学湘雅医院申良方教授答辩委员会主席二缉中南大学二零一四年五月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加

2、以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：日期：雄争[月簟日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密

3、后适应本声明。作者签名：_二墨羞垒，_日期：尘堂年j上罚导师签名日期：堕年』哼日万方数据E1A通过E6／E6AP增强宫颈癌放疗敏感性的机制研究摘要目的：探讨腺病毒E1A基因对宫颈癌放疗敏感性的影响及相关的分子生物学机制。方法：将pcDNA3．1(+)．E1A质粒转染入人宫颈癌细胞中，观察各细胞中E1A的表达，采用WesternBlot方法检测E1A基因对P53蛋白表达水平的调控及下游生物学行为的相关变化，流式细胞术检测E1A对高危型HPV阳性宫颈癌细胞放疗后凋亡的影响；免疫共沉淀揭示E1A转染入细胞后与E6AP的相互作用，并通过构建体外泛素化系统，探讨E1A、E6、E6AP对P53泛素

4、化水平的影响。结果：宫颈癌细胞内无内源性的E1A表达，通过基因转染技术，E1A能稳定地在人宫颈癌细胞中表达。WesternBlot显示E1A能明显增加HPV阳性宫颈癌细胞内p53的表达，唧V阴性的宫颈癌细胞未见到这一生物学效应。流式细胞术显示E1A能显著增加宫颈癌细胞对放疗诱导的凋亡率，该效应与P53的表达升高导致的宫颈癌细胞凋亡密切相关。免疫共沉淀明确E1A能与E6AP形成复合物，体外泛素化证明E1A通过干扰E6／E6AP复合物的形成，减少P53的降解。结论：E1A能促进宫颈癌放疗后细胞的凋亡，机制与E1A干扰E6／E6AP复合物的形成，进而抑制体内P53降解有关。关键字：E1A；E

5、6AP；宫颈癌；放射增敏分类号：R737．3II万方数据MolecularmechanismofE1A-mediatedradiosensitivitybyinterferingwithE6／E6APinteractionAbstractobjective：ToinvestigatetheeffectofadenovirusE1Ageneonradiosensifivityofcervicalcancerandthemolecularmechanisms．Methods：TotransfectpcDNA3．1(+)一E1Aplasmidintohumancervicalcancerce

6、lls，usingWesternBlottodetecttheexpressionofE1A，thenthedownstreambiologicalbehaviors，usingflowcytometrytodetecttheapoptosisinducedbyE1Ainhi曲一riskHPVpositivecervicalcancercells；employingimmunoprecipitationtoexplorewhetherE1AformscomplexwithE6AP,andinvitroubiquitinationsystemwhichrevealstheimpactof

7、E1Aontheubiquitinationlevelofp53．Results：ThereisnoendogenousE1Aexpressionincervicalcancercells．E1Acallstablyexpressedincellsthroughgenethransfection．WestemBlotshowsthatHR—HPVposititivecellsdisplayssignificantlyhigherlevelsof