mir181a通过靶向prkcd调节宫颈癌放疗敏感性

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1、MiR-181a通过靶向PRKCD调节宫颈癌放疗敏感性摘要目的：研究不同放疗敏感性的富颈癌组织中的miRNA表达的区别，筛选出放疗敏感相关的miRNA，并且研究miRNA调节放疗敏感性的机制材料和方法：假设miRNA能调节宫颈癌放疗敏感性，使用miRNA芯片筛选出不同放疗敏感性的宫颈癌的miRNA的表达。Real--timePCR验证miRNA芯片筛选的结果。根据差异表达的倍数和P值，挑选出miR--181a作为课题主要研究的miRNA。选择放疗不敏感的宫颈癌细胞SiHa，放疗敏感的宫颈癌细胞Mel80作为课题研究的细胞。miR一181a--mimic和miR一181

2、a--inhibitor转染宫颈癌细胞后，克隆形成实验检测放疗敏感性。用慢病毒载体构建稳定转染miR--181a的稳转株，体外体内实验验证稳定转染株的放疗敏感性。增殖实验，周期实验，凋亡实验检测miR—i81a调节放疗敏感性的可能机制。mRNA芯片和生物信息软件预测miR一181a可能的靶基因。双荧光素酶实验验证靶基因。Real-timePCR，westernblotting，克隆形成实验验证靶基因的表达和功能。结果：我们采用miP,NA芯片技术筛选ll例放疗敏感和7例放疗抵抗的宫颈癌标本中的miRNA表达谱，筛选出与放疗敏感相关的miRNA。结果我们筛选出8个与放疗

3、敏感相关的miRNA。挑选miRNA--181a作为我们研究的对象。过表达miR一181a能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性，低表达miR-181a能促进宫颈癌细胞的放疗敏感性。我们建立表达miR一181a的稳定转染株种植于裸鼠，体内实验验证miR一181a能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性。通过mRNA芯片技术和生物信息软件我们预测miR一181a的作用靶基因，PRKCD成为可能的靶基因。过表达miR一181a能抑制宫颈癌细胞的PRKCD的表达，而低表达miR--181a能增加宫颈癌细胞的PRKCD的表达。抑制宫颈癌细胞PRKCD的表达能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性，并且促进宫颈

4、癌细胞的PRKCD的表达能增加宫颈癌细胞的放疗敏感性。恢复高表达miR一181a的富颈癌细胞株中的PRKCD的表达能逆转miR--181a对宫颈癌细胞株对放疗抵抗作用。结论：我们认为miR一181a能通过抑制靶基因PRKCD的表达来抑制宫颈癌的放疗敏感性。关键词：miR一181a放疗敏感性PRKCD凋亡中图分类号：R732miR-181aregulatesradiosensitiVityincervicalcancerthroughtargetiAbstractPurpose：tostudytherelationbetweenmiRNAexpressionandrad

5、iosensitiVityincervicalcancer，weaimatfindingcertainmiRNAtoregulateradiosensitiVityandshowingregulatorynetwork．MethodsandMaterials：WehypothesizethatmiRNAsinterconnectwithmRNAinvolvedinradiosensitiVity，whichinfluenceintrinsicradiosensitivityoftumor．weobtainthemiRNAsassociatedlikelywithrad

6、iosensitivitythoughscreeningmiRNAsexpressionprofilinginradiosensitiveandradioresistanthumancervicalcancersampleusingmicroarray．Inordertotesttheresultofmieroarray，Real—timePolymeraseChainReactionisperformed．Cervicalcancercell，SiHaandMel80，aretransfectedbymiR一181a—mimic，miR一181a-inhibitor

7、．StablytransfectioncelllinesareconstructedbyLentivirusvectorcarryingmiR一181a．Colony—FormationAssayWaSperformedtodetecttheradiosensitivity．Throughcellproliferationassay，cellcycleassayandapoposisassay，wesearchedforthemolecularmechanismwhichmiR-181adepressedradiosensitiviy．Tofindt