cdte诱导凋亡机制及nrf2-are信号通路的研究

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1、隶南『大·警硕士学位论文万方数据CdTe诱导凋亡机制及Nrf2-ARE信号通路的研究本论文得到国家自然科学基金(30972504，81172697)以及国家重大科学研究计划项目(2011CB933404)的经费支持。万方数据STUDYoFAPOPTOSISMECHANISMANDNRF2．ARESIGNALINGPATHⅥⅢoFCDTEADissertationSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegree"ofMasterofMedicineBYHUYuanyuanSuI,

2、,rvisedbySupervisedbyProfessorTANGMengSchoolofPublicHealthSoutheastUniversityMay2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：越殛显E

3、t期：z!丝!』：!!东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：坷酝酝：导师签名：日期：Ⅻf轻6：型万方数据!茎塑茎CdTe诱导凋亡机制及Nrf2．ARE信号通路的研究中文摘要量子点(QuantumDots，QDs)作为一种

4、新型荧光纳米材料，凭借其优越的荧光性能，被广泛应用于荧光检测、细胞和动物体内示踪观察及影像学诊断等领域，在生物医学和药学等领域的应用逐渐受到人们的重视。随着量子点的广泛应用，其生物安全性问题也日益受到人们的关注，国内外许多科学家已经对其进行了一系列的研究。本课题以碲化镉(CdTe)量子点为研究对象，从整体动物和体外细胞培养不同水平上对量子点引起氧化损伤、氧化应激以及凋亡效应进行研究；然后，在分子水平上探讨量子点导致细胞凋亡作用的机制以及Nrf2．ARE信号通路保护作用。以不同剂量CdTe对小鼠正常肝细胞(AML12)进行染毒，并

5、通过细胞增殖实验、细胞形态学观察、细胞凋亡检测、DCFH．DA实验以及实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹等试验方法，对不同浓度的CdTe的毒性进行定量检测，综合分析抗氧化应激信号通路之一——-N咆．ARE信号通路在CdTe诱导AML12细胞凋亡机制中所起的作用的，并通过Nrf2．ARE信号通路激活剂特丁基对苯二酚(tBHQ)进行验证，以探讨其是否具有降低CdTe毒性，从而对量子点造成的机体损伤起到保护作用，为更好和更安全的利用CdTe从毒理学上提供生物安全性依据。通过本研究，可初步得出以下结论：1．采用电化学法制备水溶性CdTe，

6、大体呈球形，平均粒径为2．2nin，分布均匀，光学性能稳定，并具有良好的荧光性能；水溶性好，可均匀悬浮于细胞培养液中，符合实验要求。2．CdTe量子点的肝脏毒性研究。小鼠尾静脉染毒注射CdTe，观察其对小鼠肝脏的毒性作用，为量子点的在体应用提供参考。发现CdTe对小鼠体重、摄食、脏器系数及肝组织病理学没有明显的影响。血清生化检测发现白蛋白(ALB)、乳酸脱氢酶(LDH)等与肝组织有关的指标发生改变，与对照组相比差别有显著意义(尸

7、比较差别有显著意义(尸<0．05)，这可能是由于量子点激活了体内的抗氧化系统，通过增加抗氧化酶含量对抗其产生的活性氧。随着染毒剂量的上升，SOD、CAT的量逐渐下降。这可能是因为体内的抗氧化系统不足以抵消量子点产生的过量ROS，从而可能造成肝组织氧化损伤。万方数据查堕奎堂兰垡堡茎3．CdTe量子点对AML12细胞毒性的初步评价。MTT实验显示，CdTe能够使AML12细胞活性下降，对AML12细胞的半数生长抑制浓度(ICso)约为60．12gg／ml；CdTe能够影响细胞的超微结构，造成线粒体、内质网肿胀及空泡样变化，继而出现细

8、胞凋亡。4。CdTe对AML12细胞氧化应激与细胞凋亡效应研究：CdTe染毒24h后可引起AML12细胞ROS含量增加，产生氧化应激，抗氧化剂tBHQ能够降低细胞内ROS的量。同时利用流式细胞仪对AML12细胞凋亡率进行检测，发现CdTe可以使AML12细胞凋亡