bfgf促进糖尿病大鼠皮肤创面愈合药效学及蛋白质组学的研究

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3、⋯⋯⋯⋯⋯7第二部分bFGF修复糖尿病大鼠皮肤创伤药效学评价⋯⋯⋯⋯10第三部分糖尿病大鼠皮肤创面修复蛋白质组学的究⋯⋯⋯⋯⋯20参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··41综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52万方数据温州医科大学硕士学位论文bFGF促进糖尿病大鼠皮肤创伤愈合药效学及蛋白质组学的研究中文摘要目的本实验主要通过病理学检查及蛋白质方面研究来探讨碱性成纤维细胞生长因子(recom

4、binanthumanbasicfibrobloastgrowthfactor，bFGF)对糖尿病大鼠皮肤创面愈合的疗效，并讨论其治疗机制，为治疗糖尿病创口难愈性提供治疗基础。方法本实验大鼠以注射链脲佐菌素(STZ)进行糖尿病造模，造模成功2个月后进行创口造模。实验动物分为N组和DM组，每组分别以自身为对照，在大鼠臀部两侧，左侧为对照组，右侧为bFGF治疗组。取样初始时间点设在创口治疗当天记作0d，其后分别有4d，8d，12d，16d，用相机拍下创面修复情况，并将创口皮肤按初始面积环形剪下，剪下皮肤样本剪切成两部分，一部分用于病理切片，另

5、一部分用于蛋白提取。切片部分主要观察HE染色、Masson染色、免疫组化(IHC)。采用免疫印迹技术，检查创口愈合中各种因子如介导炎症、介导凋亡的情况。以此综合评价bFGF对糖尿病创口愈合的情况。结果1．通过创口修复面积的对比，DM组中在0d．8d，bFGF组与对照组并无明显差异，在12天以后差异明显，主要表现为bFGF组创口修复速度加快。可见bFGF有促糖尿病皮肤创口修复的功能。N组无论在给药还是未给药的情况下，创口愈合速度均快于DM组，但bFGF组在12d后表现出微弱的修复优势。综上可见，DM组皮肤创口比N组的愈合速度慢，bFGF在D

6、M组的创口修复中有更为明显的治疗优势。2．病理切片中，通过HE染色和Masson染色的观察，DM组皮肤创口再生的情况，bFGF可促进创口血管再生，皮层再生，毛发、汗腺等附属物的再生。同时bFGF还可使促进创臼愈合中胶原蛋白的生成。3．在免疫组化中，TGF．B1炎症因子主要发生在创口修复前12d，其集中4d、8d。casepase．3凋亡因子主要集中在4d．12d，bFGF缩短了炎症的发生时长，以及凋亡时长，但其优势并不特别明显。4。通过对所取的创口组织进行蛋白的提取，做weStemblot指标，所用抗体选择炎症因子TGF．B1、CTGF、

7、PAl一1、TNF．Q，凋亡因子c．casepase、万方数据温州医科大学硕士学位论文casepase．3，血管生成因子CD34，以及胶原I型，对创口修复过程进行蛋白质方面的研究。结论1．HE染色和Masson染色显示bFGF能促进糖尿病大鼠皮肤创口愈合2．免疫组化结果可见，bFGF能够加速炎症反应，促进细胞凋亡。3．westernblot指标观察可得bFGF促进血管和胶原的形成、促进炎症和凋亡的发生和发展。4．bFGF治疗机理有多方面的因素，主要涉及氧化应激、糖代谢等过程，其机制研究需进一步研究。‘关键词碱性成纤维生长因子；糖尿病溃疡愈

8、合；病理切片；免疫组化；免疫印迹2万方数据温州医科大学硕士学位论文PharmacoIogicalMechanismsandProteomicAnalysisofDiabeticWoundHealingwithRecombinantHumanBasicFibroblastGrowthFactorinSkinWoundofSTZDiabeticRatsAbstractobjectiveInordertoinvestigateaspectsofrecombinantbasicfibroblastgrowthfactorondiabeticrat

9、skinwoundhealingeffectbypathologicalexaminationandproteinstudies，anddiscussitstherapeuticmechani