2型糖尿病家系线粒体dna异质性突变位点检测方法的建立及相关细胞功能的研究

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1、万方数据论文题目：2型趋屋痘塞嚣缉粒佳墅盟△昱厦性塞銮鱼壶万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中英文缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7第一部分线粒体DNA异质性高通量测序技术的建立及其与2型糖尿病的相关性分析第一章材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9第二章结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．13第二部分不同异质

2、水平线粒体DNAA3243G突变永生细胞株的建立及相关功能的研究第一章材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21第二章结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．26第三部分线粒体DNAA3243G突变异质水平定量检测方法的建立第一章材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33第二章结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．

3、．49致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．62独创性申明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯64万方数据缩略词表英文缩写英文全称中文全称mtDNAmitochondrialDNA线粒体DNAADAFPGOGTTBMICIEBB．LCLsHDLLDLTrisATPRrr-ARMS-qPCROXPHOSPCR．RLFPAmericanDiabetesAssociationfastingplasmaglucoseoralgl

4、ucosetolerancetestbodymassindexConservationindexepstein—barrvirusBlymphoblastcelllineshighdensitylipoproteinlowdensitylipoproteinTrihydroxymethylaminomethaneAdenosinetriphosphateReal-timeamplificationrefractorymutationsystemquantitativePCROxidativephosphorylationPolymera

5、sechainreactioncombinedwithrestrictionfragmentlengthpolymorphism美国糖尿病协会空腹血糖口服葡萄糖耐量试验体重指数保守性指数EB病毒B淋巴母细胞系高密度脂蛋白低密度脂蛋白天羟甲基氨基甲烷腺苷三磷酸实时荧光定量PCR结合突变阻滞形成系统氧化磷酸化反应聚合酶链式反应．限制性酶切分析万方数据温州医科大学硕士学位论文2型糖尿病家系线粒体DNA异质性突变位点检测方法的建立及相关细胞功能的研究中文摘要目的1．收集母系遗传2型糖尿病家系，通过高通量捕获测序技术对其线粒体全基因组DNA进行捕

6、获测序，并定性和定量分析其2型糖尿病相关异质性突变位点；2．EB病毒转化先证者外周血B淋巴细胞，建立A3243G突变永生细胞株后通过单细胞筛选，建立相同核背景下不同异质水平的A3243G突变永生细胞株，并研究mtDNAA3243G异质性突变与线粒体功能的关系。3．为检测永生细胞株线粒体DNAA3243G突变异质水平建立一种简便但相对准确敏感的定量检测方法。对象与方法1．标本采集：病例收集依托温州医科大学附属第二医院内分泌科室。收集1个母系遗传2型糖尿病家系(共12人)，同时采集12人外周血进行常规生化指标检测并询问记录基本临床资料。2．

7、提取母系家庭成员(n=12人)外周血总DNA，调整其纯度和浓度后送往北京迈基诺测序公司进行线粒体全基因组高通量捕获测序，并对所有测序结果进行整理，分析2型糖尿病相关线粒体DNA异质性突变位点及其母系遗传特点。3．采集母系遗传2型糖尿病家系先证者外周血和1例相同单体型健康人的外周血，通过EB病毒转化，建立永生细胞系。并根据有限稀释法，制备不同异质水平的mtDNAA3243G突变永生细胞株。4．为了随时方便检测永生细胞株mtDNAA3243G异质性突变水平，建立并完善实时荧光定量PCR结合阻滞形成系统技术(RT-ARMs．qPCR)。5．利

8、用流式细胞技术、激光共聚焦技术、高效液相色谱技术和透射电镜技术对不同异质水平永生细胞株和对照永生细胞株分别进行细胞内活性氧水平(ROS)、线粒体数量、线粒体膜电位、细胞凋亡率、细胞内三磷酸腺苷水平(ATP)